فصلنامه پژوهشی خون

چکیده
سابقه و هدف 
ویروس HTLV-1 اولین رتروویروس انکوژن انسانی است که با بیماری‌های ATL و HAM/TSP مرتبط می‌باشد. ژن HBZ به‌عنوان یکی از ژن‌های کلیدی این ویروس، به دلیل ایمنی‌زایی پایین و پایداری ژنتیکی، نقش مهمی در پیشرفت بیماری ایفا می‌کند. با وجود پیشرفت روش‌های تشخیصی مانند الایزا و وسترن بلات، در برخی موارد نتایج نامشخص گزارش می‌شود. از سوی دیگر، اندازه‌گیری بار ویروسی در پیش‌آگهی بیماری اهمیت دارد. در این مطالعه، با استفاده از روش TaqMan Real Time PCR، سیستمی حساس برای تعیین پرووایرال لود HTLV-1 بر اساس ژن HBZ طراحی و راه‌اندازی شد.
مواد و روش‌ها
در این مطالعه تجربی، آغازگرها و پروب برای ناحیه¬ای از ژن HBZ به طولbp  106 طراحی گردید. سپس DNA ژنومی از سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی یا PBMCs استخراج شد. پس از تکثیر ژن HBZ ، محصول PCR در پلاسمیدTOPO TA vector  کلون گردید و از آن به عنوان استاندارد جهت راه‌اندازی روش TaqMan Real Time PCR استفاده شد. 
یافته‌ها
برای رسم منحنی استاندارد، از پلاسمید نوترکیب رقت‌های لگاریتمی 108-101× 1/2 تهیه گردید. در این آزمایش، شیب خط منحنی استاندارد برابر با 2/3- وR2  برابر با 0.97 بود که نشان‌دهنده خطی بودن و کارآیی آزمایش می‌باشد. نتایج تکرارپذیری واکنش در سطح درون‌سنجی و بین سنجی (در قالب سه تکرار در هر مرحله کاری) و میانگین ضریب تغییرات CV برای نمونه‌های استاندارد، به ترتیب کمتر از 5/3 % و 5/9 % بود. هم‌چنین کمترین حد تشخیص این آزمایش برابر با Copies/µL 1/2× 101 بوده که نشان‌دهنده حساسیت بالای این روش می‌باشد.
نتیجه گیری            
استفاده از روش Real Time PCR TaqMan با توجه به حساسیت بالا، آنالیز و کاربرد آسان می¬تواند روش مناسبی برای تعیین بار پرووایرال ویروس HTLV-1 باشد و امکان پیش‌آگهی دقیق‌تری از بروز بیماری‌ها به واسطه این ویروس را فراهم کند.
کلمات کلیدی: بار ویروسی، Real Time PCR ، HTLV-1