جلد 22، شماره 2 - ( تابستان 1404 )                   جلد 22 شماره 2 صفحات 99-91 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Teimoori R, Sharifi Z, Pourkarim M R, Ajorloo M. Development of a TaqMan Real Time PCR Assay for Quantifying the HTLV-1 Proviral Load Using the HBZ Gene. Journal of Iranian Blood Transfusion 2025; 22 (2) :91-99
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1573-fa.html
تیموری ریحانه، شریفی زهره، پورکریم محمودرضا، آجورلو مهدی. راه اندازی روشReal Time PCR TaqMan جهت تعیین میزان بار پرووایرال ویروس HTLV-1 با استفاده از ژن HBZ. فصلنامه پژوهشی خون. 1404; 22 (2) :91-99

URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1573-fa.html


استادیار مرکز تحقیقات فرآورده‌های بیولوژیک و سلامت خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
چکیده:   (143 مشاهده)

چکیده
سابقه و هدف 
ویروس HTLV-1 اولین رتروویروس انکوژن انسانی است که با بیماری‌های ATL و HAM/TSP مرتبط می‌باشد. ژن HBZ به‌عنوان یکی از ژن‌های کلیدی این ویروس، به دلیل ایمنی‌زایی پایین و پایداری ژنتیکی، نقش مهمی در پیشرفت بیماری ایفا می‌کند. با وجود پیشرفت روش‌های تشخیصی مانند الایزا و وسترن بلات، در برخی موارد نتایج نامشخص گزارش می‌شود. از سوی دیگر، اندازه‌گیری بار ویروسی در پیش‌آگهی بیماری اهمیت دارد. در این مطالعه، با استفاده از روش TaqMan Real Time PCR، سیستمی حساس برای تعیین پرووایرال لود HTLV-1 بر اساس ژن HBZ طراحی و راه‌اندازی شد.
مواد و روش‌ها
در این مطالعه تجربی، آغازگرها و پروب برای ناحیه¬ای از ژن HBZ به طولbp  106 طراحی گردید. سپس DNA ژنومی از سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی یا PBMCs استخراج شد. پس از تکثیر ژن HBZ ، محصول PCR در پلاسمیدTOPO TA vector  کلون گردید و از آن به عنوان استاندارد جهت راه‌اندازی روش TaqMan Real Time PCR استفاده شد. 
یافته‌ها
برای رسم منحنی استاندارد، از پلاسمید نوترکیب رقت‌های لگاریتمی 108-101× 1/2 تهیه گردید. در این آزمایش، شیب خط منحنی استاندارد برابر با 2/3- وR2  برابر با 0.97 بود که نشان‌دهنده خطی بودن و کارآیی آزمایش می‌باشد. نتایج تکرارپذیری واکنش در سطح درون‌سنجی و بین سنجی (در قالب سه تکرار در هر مرحله کاری) و میانگین ضریب تغییرات CV برای نمونه‌های استاندارد، به ترتیب کمتر از 5/3 % و 5/9 % بود. هم‌چنین کمترین حد تشخیص این آزمایش برابر با Copies/µL 1/2× 101 بوده که نشان‌دهنده حساسیت بالای این روش می‌باشد.
نتیجه گیری            
استفاده از روش Real Time PCR TaqMan با توجه به حساسیت بالا، آنالیز و کاربرد آسان می¬تواند روش مناسبی برای تعیین بار پرووایرال ویروس HTLV-1 باشد و امکان پیش‌آگهی دقیق‌تری از بروز بیماری‌ها به واسطه این ویروس را فراهم کند.
کلمات کلیدی: بار ویروسی، Real Time PCR ، HTLV-1

واژه‌های کلیدی: بار ویروسی، Real Time PCR، HTLV-1
متن کامل [PDF 800 kb]   (63 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ويروس شناسي

فهرست منابع
1. Poiesz BJ, Ruscetti FW, Gazdar AF, Bunn PA, Minna JD, Gallo RC. Detection and isolation of type C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T-cell lymphoma. Proc Natl Acad Sci U S A. 1980 Dec;77(12):7415-9. [DOI:10.1073/pnas.77.12.7415] [PMID] []
2. Naderi M, Talebi S, Buyzan A, Yousefi Nojookambari N, Yazdansetad S. The Interaction of Cell-Human T-cell Leukemia Virus Type 1 (HTLV-1) in the Development of Adult T-cell Leukemia/Lymphoma: The Molecular Aspects of Leukemogenesis. Razi Journal of Medical Sciences. 2022;29(6):25-37.https://rjms.iums.ac.ir/article-1-7259-en.html
3. Keikha M, Karbalaei Zadeh Babaki M, Marcondes Fonseca LA, Casseb J. The Relevance of HTLV-1-associated Myelopathy/Tropical Spastic Paraparesis in Iran: A Review Study. Reviews in Clinical Medicine. 2019;6(2):60-5. [DOI:10.22038/rcm.2019.38759.1266]
4. Mohanty S, Harhaj EW. Mechanisms of Innate Immune Sensing of HTLV-1 and Viral Immune Evasion. Pathogens. 2023 May 19;12(5):735. [DOI:10.3390/pathogens12050735] [PMID] []
5. Letafati A, Bahari M, Salahi Ardekani O, Nayerain Jazi N, Nikzad A, Norouzi F, Mahdavi B, Aboofazeli A, Mozhgani SH. HTLV-1 vaccination Landscape: Current developments and challenges. Vaccine X. 2024 Jul16;19:100525. [DOI:10.1016/j.jvacx.2024.100525] [PMID] []
6. Herrmann D, Meng S, Yang H, Mansky LM, Saad JS. The Assembly of HTLV-1-How Does It Differ from HIV-1? Viruses. 2024 Sep 27;16(10):1528. [DOI:10.3390/v16101528] [PMID] []
7. Enose-Akahata Y, Vellucci A, Jacobson S. Role of HTLV-1 Tax and HBZ in the Pathogenesis of HAM/TSP. Front Microbiol. 2017 Dec 21;8:2563. [DOI:10.3389/fmicb.2017.02563] [PMID] []
8. Giam CZ, Semmes OJ. HTLV-1 Infection and Adult T-Cell Leukemia/Lymphoma-A Tale of Two Proteins: Tax and HBZ. Viruses. 2016 Jun 16;8(6):161. [DOI:10.3390/v8060161] [PMID] []
9. El Hajj H, Bazarbachi A. Interplay between innate immunity and the viral oncoproteins Tax and HBZ in the pathogenesis and therapeutic response of HTLV-1 associated adult T cell leukemia. Front Immunol. 2022 Jul 22;13:957535. [DOI:10.3389/fimmu.2022.957535] [PMID] []
10. Cassar O, Gessain A. Serological and Molecular Methods to Study Epidemiological Aspects of Human T-Cell Lymphotropic Virus Type 1 Infection. Methods Mol Biol. 2017;1582:3-24. [DOI:10.1007/978-1-4939-6872-5_1] [PMID]
11. Caterino-de-Araujo A, Campos KR. Defective particles of human T-lymphotropic virus and negative results in molecular assays. Infect Genet Evol. 2021 Dec;96:105141. [DOI:10.1016/j.meegid.2021.105141] [PMID]
12. Ghasemzadegan H, Shahabi M, Rezaei N, Sharifi Z. Design a Real Time PCR with SYBR Green for quantification of HTLV-1 proviral load for blood donors. The Scientific Journal of Iranian Blood Transfusion Organization. 2019;16(3):194-200. https://bloodjournal.ir/browse.php?a_id=1248&sid=1&slc_lang=en
13. Ji H, Chang L, Yan Y, Wang L. Development and validation of a duplex real-time PCR for the rapid detection and quantitation of HTLV-1. Virol J. 2023 Jan 17;20(1):9. [DOI:10.1186/s12985-023-01970-y] [PMID] []
14. Eusebio-Ponce E, Anguita E, Paulino-Ramirez R, Candel FJ. HTLV-1 infection: An emerging risk. Pathogenesis, epidemiology, diagnosis and associated diseases. Rev Esp Quimioter. 2019 Dec;32(6):485-496. https://seq.es/abstract/rev-esp-quimioter-2019-october-25-2/
15. Zhao J, Zhao F, Han W, Xu X, Wang L, Li R, et al. HTLV screening of blood donors using chemiluminescence immunoassay in three major provincial blood centers of China. BMC Infect Dis. 2020 Aug 6;20(1):581. [DOI:10.1186/s12879-020-05282-2] [PMID] []
16. A Strategy for Screening and Confirmation of HTLV-1/2 Infections in Low-Endemic Areas. Front Microbiol. 2020 Jun 3;11:1151. [DOI:10.3389/fmicb.2020.01151] [PMID] []
17. Saito M, Matsuzaki T, Satou Y, Yasunaga J, Saito K, Arimura K, et al. In vivo expression of the HBZ gene of HTLV-1 correlates with proviral load, inflammatory markers and disease severity in HTLV-1 associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). Retrovirology. 2009 Feb 19;6:19. [DOI:10.1186/1742-4690-6-19] [PMID] []
18. Waters A, Oliveira AL, Coughlan S, de Venecia C, Schor D, Leite AC, et al. Multiplex real-time PCR for the detection and quantitation of HTLV-1 and HTLV-2 proviral load: addressing the issue of indeterminate HTLV results. J Clin Virol. 2011 Sep;52(1):38-44. [DOI:10.1016/j.jcv.2011.05.022] [PMID]
19. Casoli C, Pilotti E, Bertazzoni U. Proviral load determination of HTLV-1 and HTLV-2 in patients' peripheral blood mononuclear cells by real-time PCR. Methods Mol Biol. 2014;1087:315-23. [DOI:10.1007/978-1-62703-670-2_25] [PMID]
20. U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration. Bioanalytical Method Validation Guidance for Industry. Silver Spring, MD: U.S. Department of Health and Human Services, Center for Drug Evaluation and Research (CDER); May 2018. https://www.fda.gov/files/drugs/published/Bioanalytical-Method-Validation-Guidance-for-Industry.pdf

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به فصلنامه پژوهشی خون می‌باشد.

طراحی و برنامه نویسی: یکتاوب افزار شرق

© 2025 CC BY-NC 4.0 | Journal of Iranian Blood Transfusion

Designed & Developed by: Yektaweb