دانشیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران ـ
چکیده: (20997 مشاهده)
چکید ه
سابقه و هدف
HO-1 (هِم‌اکسیژناز-1) یکی از عوامل قدرتمند محافظت کننده سلولی می‌باشد. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان موقت ژن HO-1 انسانی در سلول‌های بنیادی مزانشیمال( MSC ها) با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی برمبنای تکنولوژی Gateway بود.
مواد و روش‌ها
در یک مطالعه تجربی، به منظور القای HO-1 ، رده سلولی 549 A به مدت 1 ساعت با اشعه UV مواجه گردید. cDNA توتال HO-1 جداسازی شد و از طریق واکنش کلونینگ TOPO به وکتور pENTR TOPO/D کلون گردید. برای ایجاد کلون بیانی، واکنش نوترکیبی LR بین کلون اولیه و وکتور مقصد( pAd/CMV/V5-DEST ) به انجام رسید. ویروس نوترکیب در رده سلولی یوکاریوتی مناسب تشکیل شد. MSC ها به وسیله ویروس نوترکیب بیان‌کننده HO-1 آلوده‌سازی شدند.
یافته‌ها
نتایج نشان داد که HO-1 انسانی نوترکیب با موفقیت کلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحیح درون وکتور به وسیله تعیین توالی DNA تایید شد. بیان HO-1 در MSC ها به وسیله آنالیز RT-PCR و وسترن بلات تایید گردید. این نتایج حاکی از این بود که بیان HO-1 موقت است.
نتیجه گیری
بیان موقت ژن HO-1 انسانی در MSC ها با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی، ممکن است یک استراتژی انتقال ژنی کارآمد در راستای ارتقای سلول درمانی فراهم نماید.
Hamedi Asl P, Halabian R, Mohammadzadeh M, Mohammadipour M, Bakhshandeh Z, Hamedi Asl D, et al . Cloning and transient expression of cytoprotective factor, HO-1, in mesenchymal stem cells using the adenoviral expression system through Gateway technology. Sci J Iran Blood Transfus Organ 2012; 9 (3) :214-225 URL: http://bloodjournal.ir/article-1-662-fa.html
حامدی اصل پژمان، حلبیان راحله، محمدزاده محمد، محمدی‌پور مهشید، بخشنده زهرا، حامدی اصل داریوش، و همکاران. و همکاران.. کلونینگ و بیان موقت ژن محافظت‌کننده سلولی، HO-1 ، در سلول‌های بنیادی مزانشیمال از طریق سیستم بیانی آدنوویروس بر مبنای تکنولوژی Gateway. فصلنامه پژوهشی خون. 1391; 9 (3) :214-225
