fa کلونینگ و بیان موقت ژن محافظت‌کننده سلولی، HO-1 ، در سلول‌های بنیادی مزانشیمال از طریق سیستم بیانی آدنوویروس بر مبنای تکنولوژی Gateway سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  </p><p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> HO-1 </strong><strong>(هِم‌اکسیژناز-1) یکی از عوامل قدرتمند محافظت کننده سلولی می‌باشد. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان موقت ژن </strong><strong>HO-1 </strong><strong>انسانی در سلول‌های بنیادی مزانشیمال( </strong><strong>MSC </strong><strong>ها) با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی برمبنای تکنولوژی </strong><strong>Gateway </strong><strong>بود. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در یک مطالعه تجربی، به منظور القای </strong><strong>HO-1 </strong><strong>، رده سلولی 549 </strong><strong>A </strong><strong>به مدت 1 ساعت با اشعه </strong><strong>UV </strong><strong>مواجه گردید. </strong><strong>cDNA </strong><strong>توتال </strong><strong>HO-1 </strong><strong>جداسازی شد و از طریق واکنش کلونینگ </strong><strong>TOPO </strong><strong>به وکتور </strong><strong>pENTR TOPO/D </strong><strong>کلون گردید. برای ایجاد کلون بیانی، واکنش نوترکیبی </strong><strong>LR </strong><strong>بین کلون اولیه و وکتور مقصد( </strong><strong>pAd/CMV/V5-DEST </strong><strong>) به انجام رسید. ویروس نوترکیب در رده سلولی یوکاریوتی مناسب تشکیل شد. </strong><strong>MSC </strong><strong>ها به وسیله ویروس نوترکیب بیان‌کننده </strong><strong>HO-1 </strong><strong>آلوده‌سازی شدند. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> نتایج نشان داد که </strong><strong>HO-1 </strong><strong>انسانی نوترکیب با موفقیت کلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحیح درون وکتور به وسیله تعیین توالی </strong><strong>DNA </strong><strong>تایید شد. بیان </strong><strong>HO-1 </strong><strong>در </strong><strong>MSC </strong><strong>ها به وسیله آنالیز </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>و وسترن بلات تایید گردید. این نتایج حاکی از این بود که بیان </strong><strong>HO-1 </strong><strong>موقت است. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> بیان موقت ژن </strong><strong>HO-1 </strong><strong>انسانی در </strong><strong>MSC </strong><strong>ها با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی، ممکن است یک استراتژی انتقال ژنی کارآمد در راستای ارتقای سلول درمانی فراهم نماید. </strong></p><p>   </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Heme oxegenase1 (HO-1) is one of the potent cytoprotective factors. The goal of this study was to perform cloning and transient over expression of the human HO-1 gene in mesenchymal stem cells (MSCs) using the adenoviral expression system based on the gateway technology.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In order to induce expression of HO-1, A549 cell lines were exposed to UV for 1 hour. The full length cDNA of HO-1 was isolated and cloned into pENTR TOPO/D vector by TOPO cloning reaction. To construct the expression clone, a LR recombination reaction was carried out between the entry clone and destination vector, pAd/CMV/V5-DEST. The recombinant virus was produced in the appropriate mammalian cell line. MSCs were infected by the recombinant virus expressing HO-1.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> The results showed that human recombinant HO-1 was successfully cloned and the accuracy of the gene and its frame in the vector were confirmed by DNA sequencing. Expression of HO-1 in MSCs was confirmed by RT-PCR and western blot analysis. The results indicated that the expression of HO-1 is transient.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions </i></strong></p><p> Transient expression of human HO-1 gene in MSCs by using adenovirus expression system may be considered as an efficient gene transfer strategy into MSCs in order to promote stem cell therapy. </p><p> <strong> </strong></p><p>   </p> کلمات کلیدی : سلول‌های بنیادی مزانشیمال, هم‌اکسیژناز-1, مهندسی ژنتیک, آدنوویروس‌ها Key words: Mesenchymal Stem Cells, Heme Oxygenase-1, Genetic Engineering, Adenoviruses 214 225 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-264&slc_lang=fa&sid=1 P. Hamedi Asl پژمان حامدی اصل 910031947532846009604 910031947532846009604 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران R. Halabian راحله حلبیان 910031947532846009605 910031947532846009605 No دانشگاه تربیت مدرس ـ تهران ـ ایران M. Mohammadzadeh محمد محمدزاده 910031947532846009606 910031947532846009606 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران M. Mohammadipour مهشید محمدی‌پور 910031947532846009607 910031947532846009607 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران Z. Bakhshandeh زهرا بخشنده 910031947532846009608 910031947532846009608 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران Dr. Hamedi Asl داریوش حامدی اصل 910031947532846009609 910031947532846009609 No انستیتو تحقیقاتی سرم و واکسن‌سازی رازی کرج ـ ایران A.A. kianin علی‌اصغر کیانی 910031947532846009610 910031947532846009610 No مربی دانشگاه علوم پزشکی لرستان ـ خرم‌آباد ـ ایران M.A. Jalili محمد علی جلیلی 910031947532846009611 910031947532846009611 No استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران N. Amirizadeh ناصر امیری زاده 910031947532846009612 910031947532846009612 No استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران M. Habibi Roudkenar مهریار حبیبی رودکنار roudkenar@ibto.ir 910031947532846009613 910031947532846009613 Yes دانشیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون ـ تهران ـ ایران ـ