جلد 23، شماره 1 - ( بهار 1405 )
جلد 23 شماره 1 صفحات 21-12 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Ethics code: TMI.IR 1395
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Mousavi Dehaqani L, Sharifi Z. Inactivation of HSV-1 Using Methylene Blue and Visible Light: Correlation of TCID50 Reduction with Glycoprotein D RNA Expression by RT-qPCR. bloodj 2026; 23 (1) :12-21
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1609-fa.html
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1609-fa.html
موسوی دهاقانی لیلا، شریفی زهره. غیرفعالسازی ۱-HSV با متیلن بلو و نور مرئی: همبستگی کاهش TCID50 با بیان RNA گلیکوپروتئین D با روش RT-qPCR. فصلنامه پژوهشی خون. 1405; 23 (1) :12-21
استاد مرکز تحقیقات فرآوردههای بیولوژیک و سلامت خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
چکیده: (396 مشاهده)
چکیده
سابقه و هدف
علیرغم پیشرفتهای قابل توجه در سلامت خون، خطر انتقال عوامل عفونی همچنان یک چالش برای مراکز انتقال خون است. برای افزایش سلامت خون، روشهایی برای حذف یا غیرفعال کردن ویروسها توسعه یافته است. این مطالعه بر غیرفعالسازی ویروس هرپس سیمپلکس نوع ۱ ( HSV-1)با استفاده از متیلنبلو و نور مرئی در پلاسما تمرکز دارد و اثربخشی غیر فعالسازی را با روشهای qRT-PCR و TCID50 مقایسه میکند.
مواد و روشها
در یک مطالعه تجربی سلول Vero در محیط DMEM با 1% پنیسیلین-استرپتومایسین و 10% سرم جنین گوساله در دمای 37 درجه سانتیگراد با 5% CO2 کشت داده شدند. تیتر ویروس با آلودهسازی این سلولها تعیین شد. متعاقب آن، ذخیره ویروس در حجم 0/1 پلاسما به آن اضافه شد. ویروس به پنج واحد پلاسمای جداگانه که از اهداکنندگان خون مختلف به دست آمده بود، اضافه شد. پنج نمونه پلاسمای حاوی ویروس با متیلن بلو ۱ میکرومولار تیمار شدند و سپس به مدت ۱۰ دقیقه در طول موج ۶۲۷ نانومتر تحت پرتودهی قرار گرفتند. تیتراسیون ویروس در پلیتهای ۹۶ چاهکی انجام شد و تیتر ویروس قبل و بعد از پرتودهی از طریق رقتهای سریالی 10 برابری با روش TCID50اندازهگیری شد. گروه کنترل شامل پلاسمای بدون ویروس، پلاسمای حاوی ویروس پرتودهی شده بدون متیلنبلو و پلاسمای حاوی متیلنبلو بدون پرتودهی بود. پس از استخراج RNA ازرقتها و ساخت cDNA ، بیان گلیکوپروتئین D با qRT-PCR اندازهگیری شد. تمامی آزمایشها 3 مرتبه تکرار گردید. در نهایت محاسبات آماری و تجزیه و تحلیل دادهها با نرمافزار 26 SPSS انجام شد و ضریب همبستگی پیرسون بین دو آزمایش محاسبه گردید.
یافتهها
قبل از غیر فعالسازی، تیتر ویروس با مشاهده اثرات سیتوپاتیک در سلولهای Vero به صورت TCID50/mL 107 تعیین شد. پس از غیرفعالسازی با متیلن بلو و پرتودهی، تیتر به TCID50/mL 102 کاهش یافت که نشاندهنده کاهش ۵ لگاریتمی است. میانگین چرخه آستانه (Ct) ژن گلیکوپروتئین D در کشتهای سلولی حاوی HSV-1 غیرفعال نشده (TCID50/mL 107(، 22/6 (22/6 Ct=) بود، در حالی که میانگین Ct ژن گلیکوپروتئین D در نمونههای پلاسما پس از غیرفعال شدن توسط متیلن بلو و نور مرئی (TCID50/mL 102)، 28 (28 Ct=)، بود . این نشان دهنده کاهش 15 برابری در بیان گلیکوپروتئین D است (0.001 =p).
نتیجه گیری
بین مقادیر لگاریتمی TCID50 و مقادیر Ct به دست آمده از روش qRT-PCR همبستگی مشاهده شد. روشهای مولکولی مبتنی بر بیان گلیکوپروتئین (gD mRNA) D ممکن است به عنوان یک رویکرد مفید برای تشخیص عفونت فعال HSV به کار گرفته شوند.
سابقه و هدف
علیرغم پیشرفتهای قابل توجه در سلامت خون، خطر انتقال عوامل عفونی همچنان یک چالش برای مراکز انتقال خون است. برای افزایش سلامت خون، روشهایی برای حذف یا غیرفعال کردن ویروسها توسعه یافته است. این مطالعه بر غیرفعالسازی ویروس هرپس سیمپلکس نوع ۱ ( HSV-1)با استفاده از متیلنبلو و نور مرئی در پلاسما تمرکز دارد و اثربخشی غیر فعالسازی را با روشهای qRT-PCR و TCID50 مقایسه میکند.
مواد و روشها
در یک مطالعه تجربی سلول Vero در محیط DMEM با 1% پنیسیلین-استرپتومایسین و 10% سرم جنین گوساله در دمای 37 درجه سانتیگراد با 5% CO2 کشت داده شدند. تیتر ویروس با آلودهسازی این سلولها تعیین شد. متعاقب آن، ذخیره ویروس در حجم 0/1 پلاسما به آن اضافه شد. ویروس به پنج واحد پلاسمای جداگانه که از اهداکنندگان خون مختلف به دست آمده بود، اضافه شد. پنج نمونه پلاسمای حاوی ویروس با متیلن بلو ۱ میکرومولار تیمار شدند و سپس به مدت ۱۰ دقیقه در طول موج ۶۲۷ نانومتر تحت پرتودهی قرار گرفتند. تیتراسیون ویروس در پلیتهای ۹۶ چاهکی انجام شد و تیتر ویروس قبل و بعد از پرتودهی از طریق رقتهای سریالی 10 برابری با روش TCID50اندازهگیری شد. گروه کنترل شامل پلاسمای بدون ویروس، پلاسمای حاوی ویروس پرتودهی شده بدون متیلنبلو و پلاسمای حاوی متیلنبلو بدون پرتودهی بود. پس از استخراج RNA ازرقتها و ساخت cDNA ، بیان گلیکوپروتئین D با qRT-PCR اندازهگیری شد. تمامی آزمایشها 3 مرتبه تکرار گردید. در نهایت محاسبات آماری و تجزیه و تحلیل دادهها با نرمافزار 26 SPSS انجام شد و ضریب همبستگی پیرسون بین دو آزمایش محاسبه گردید.
یافتهها
قبل از غیر فعالسازی، تیتر ویروس با مشاهده اثرات سیتوپاتیک در سلولهای Vero به صورت TCID50/mL 107 تعیین شد. پس از غیرفعالسازی با متیلن بلو و پرتودهی، تیتر به TCID50/mL 102 کاهش یافت که نشاندهنده کاهش ۵ لگاریتمی است. میانگین چرخه آستانه (Ct) ژن گلیکوپروتئین D در کشتهای سلولی حاوی HSV-1 غیرفعال نشده (TCID50/mL 107(، 22/6 (22/6 Ct=) بود، در حالی که میانگین Ct ژن گلیکوپروتئین D در نمونههای پلاسما پس از غیرفعال شدن توسط متیلن بلو و نور مرئی (TCID50/mL 102)، 28 (28 Ct=)، بود . این نشان دهنده کاهش 15 برابری در بیان گلیکوپروتئین D است (0.001 =p).
نتیجه گیری
بین مقادیر لگاریتمی TCID50 و مقادیر Ct به دست آمده از روش qRT-PCR همبستگی مشاهده شد. روشهای مولکولی مبتنی بر بیان گلیکوپروتئین (gD mRNA) D ممکن است به عنوان یک رویکرد مفید برای تشخیص عفونت فعال HSV به کار گرفته شوند.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
ويروس شناسي
فهرست منابع
1. Yao C-Y, Fu W-L. Biosensors for hepatitis B virus detection. World J Gastroenterol. 2014; 20(35): 12485-92. [DOI:10.3748/wjg.v20.i35.12485] [PMID] []
2. Wang YF, Pang DW, Zhang ZL, Zheng HZ, Cao JP, Shen JT. Visual gene diagnosis of HBV and HCV based on nanoparticle probe amplification and silver staining enhancement. J Med virol. 2003; 70(2): 205-11. [DOI:10.1002/jmv.10379] [PMID]
3. Quint WG, Heijtink RA, Schirm J, Gerlich WH, Niesters HG. Reliability of methods for hepatitis B virus DNA detection. J Cli Microbiol. 1995; 33(1): 225-8. [DOI:10.1128/jcm.33.1.225-228.1995] [PMID] []
4. Elikaei A, Hosseini SM, Sharifi Z, Latifi H, Nikbakht H, Mirshafiee H, et al. Methylene blue based device for pathogen reduction in human plasma. Iran J Ped Hematol Oncol. 2013; 3(3): 97-102.
5. Ryan KJ, Ray CG. Medical microbiology: An introduction to infectious diseases: McGraw-Hill; Medical Publishing Division.2004.4th edition.
6. Mettenleiter TC, Klupp BG, Granzow H. Herpesvirus assembly: a tale of two membranes. Curr Opin Microbiol. 2006; 9(4): 423-9. [DOI:10.1016/j.mib.2006.06.013] [PMID]
7. McGeoch DJ, Rixon FJ, Davison AJ. Topics in herpesvirus genomics and evolution. Virus research. 2006; 117(1): 90-104. [DOI:10.1016/j.virusres.2006.01.002] [PMID]
8. Clarke RW. Forces and Structures of the Herpes Simplex Virus (HSV) Entry Mechanism. ACS Infectious Diseases. 2015; 1(9): 403-15. [DOI:10.1021/acsinfecdis.5b00059] [PMID]
9. Akhtar J, Shukla D. Viral entry mechanisms: cellular and viral mediators of herpes simplex virus entry. FEBS J. 2009; 276(24): 7228-36. [DOI:10.1111/j.1742-4658.2009.07402.x] [PMID] []
10. Gustafsson RK Engdahl E, Fogdell-Hahn A. Development and validation of aQ-PCR based TCID50 method for human herpesvirus 6. Virol J. 2012; 9: 311. [DOI:10.1186/1743-422X-9-311] [PMID] []
11. Brandolini M, Taddei F , Marino MM , Grumiro L , Scalcione A , Turba ME, et al. Correlating qRT-PCR, dPCR and Viral Titration for the Identification and Quantification of SARS-CoV-2: A New Approach for Infection Management. Viruses. 2021 ; 13(6):1022. [DOI:10.3390/v13061022] [PMID] []
12. Elikaei A, Sharifi Z, Hosseini SM, Latifi H, Musavi Hosseini MK. Inactivation of model viruses suspended in fresh frozen plasma using novel methylene blue based device. Iran J Microbiol. 2014; 6: 41-5.
13. Reed LJ, Muench H. A Simple Method of Estimating Fifty Percent Endpoints. Am J Epidemiol. 1938: 27, 493-7. [DOI:10.1093/oxfordjournals.aje.a118408] []
14. Lei C ,Yang J , Hu J, Sun X. On the Calculation of TCID50 for Quantitation of Virus Infectivity. Virol Sin. 2021: 36(1), 141- 4. [DOI:10.1007/s12250-020-00230-5] [PMID] []
15. Zamanian M, Sharifi Z, Noormohammadi Z, Akbarzadeh T, Bineshian F. Antiviral effect of Artemisia aucheri aqueous extract on UL46 and US6 genes of HSV-1. Antivir Ther. 2021; 26(1-2): 43-8. [DOI:10.1177/13596535211039907] [PMID]
16. Stelzer-Braid S, Walker GJ, Aggarwal A, Isaacs SR, Yeang M, Naing Z, et al. Virus isolation of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) for diagnostic and research purposes. Pathology .2020; 52: 760-3. [DOI:10.1016/j.pathol.2020.09.012] [PMID] []
17. Lei C, Yang J, Hu J, Sun X. On the Calculation of TCID50 for Quantitation of Virus Infectivity. Virol Sin. 2021; 36: 141-4. [DOI:10.1007/s12250-020-00230-5] [PMID] []
18. Amanat F, White KM, Miorin L, Strohmeier Sh, McMahon M, Meade P, et al. An In Vitro Microneutralization Assay for SARS-CoV-2 Serology and Drug Screening. Curr Protoc Microbiol. 2020; 58(10): e108. [DOI:10.1002/cpmc.108] [PMID] []
19. Logan M, Manalil J, Notte Ch, Kearse C, George S, Zeiser A, et al. A flow cytometric granularity assay for the quantification of infectious virus. Vaccine . 2019; 37(47): 7090- 9. [DOI:10.1016/j.vaccine.2019.02.059] [PMID]
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
