Ethics code: TMI.IR 1395
استاد مرکز تحقیقات فرآوردههای بیولوژیک و سلامت خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
چکیده: (30 مشاهده)
چکیده
سابقه و هدف
علیرغم پیشرفتهای قابل توجه در سلامت خون، خطر انتقال عوامل عفونی همچنان یک چالش برای مراکز انتقال خون است. برای افزایش سلامت خون، روشهایی برای حذف یا غیرفعال کردن ویروسها توسعه یافته است. این مطالعه بر غیرفعالسازی ویروس هرپس سیمپلکس نوع ۱ ( HSV-1)با استفاده از متیلنبلو و نور مرئی در پلاسما تمرکز دارد و اثربخشی غیر فعالسازی را با روشهای qRT-PCR و TCID50 مقایسه میکند.
مواد و روشها
سلول Vero در محیط DMEM با 1% پنیسیلین-استرپتومایسین و 10% سرم جنین گوساله در دمای 37 درجه سانتیگراد با 5% CO2 کشت داده شدند. تیتر ویروس با آلودهسازی این سلولها تعیین شد. متعاقب آن، ذخیره ویروس در حجم 0/1 پلاسما به آن اضافه شد. ویروس به پنج واحد پلاسمای جداگانه که از اهداکنندگان خون مختلف به دست آمده بود، اضافه شد. پنج نمونه پلاسمای حاوی ویروس با متیلن بلو ۱ میکرومولار تیمار شدند و سپس به مدت ۱۰ دقیقه در طول موج ۶۲۷ نانومتر تحت پرتودهی قرار گرفتند. تیتراسیون ویروس در پلیتهای ۹۶ چاهکی انجام شد و تیتر ویروس قبل و بعد از پرتودهی از طریق رقتهای سریالی 10 برابری با روش TCID50اندازهگیری شد. گروه کنترل شامل پلاسمای بدون ویروس، پلاسمای حاوی ویروس پرتودهی شده بدون متیلنبلو و پلاسمای حاوی متیلنبلو بدون پرتودهی بود. پس از استخراج RNA ازرقتها و ساخت cDNA ، بیان گلیکوپروتئین D با qRT-PCR اندازهگیری شد. تمامی آزمایشها 3 مرتبه تکرار گردید. در نهایت محاسبات آماری و تجزیه و تحلیل دادهها با نرمافزار 26 SPSS انجام شد و ضریب همبستگی پیرسون بین دو آزمایش محاسبه گردید.
یافتهها
قبل از غیر فعالسازی، تیتر ویروس با مشاهده اثرات سیتوپاتیک در سلولهای Vero به صورت TCID50/mL 107 تعیین شد. پس از غیرفعالسازی با متیلن بلو و پرتودهی، تیتر به TCID50/mL 102 کاهش یافت که نشاندهنده کاهش ۵ لگاریتمی است. میانگین چرخه آستانه (Ct) ژن گلیکوپروتئین D در کشتهای سلولی حاوی HSV-1 غیرفعال نشده (TCID50/mL 107(، 22/6 (22/6 Ct=) بود، در حالی که میانگین Ct ژن گلیکوپروتئین D در نمونههای پلاسما پس از غیرفعال شدن توسط متیلن بلو و نور مرئی (TCID50/mL 102)، 28 (28 Ct=)، بود . این نشان دهنده کاهش 15 برابری در بیان گلیکوپروتئین D است (0.001 =p).
نتیجه گیری
بین مقادیر لگاریتمی TCID50 و مقادیر Ct به دست آمده از روش qRT-PCR همبستگی مشاهده شد. روشهای مولکولی مبتنی بر بیان گلیکوپروتئین D (gD mRNA) ممکن است به عنوان یک رویکرد مفید برای تشخیص عفونت فعال HSV به کار گرفته شوند.
سابقه و هدف
علیرغم پیشرفتهای قابل توجه در سلامت خون، خطر انتقال عوامل عفونی همچنان یک چالش برای مراکز انتقال خون است. برای افزایش سلامت خون، روشهایی برای حذف یا غیرفعال کردن ویروسها توسعه یافته است. این مطالعه بر غیرفعالسازی ویروس هرپس سیمپلکس نوع ۱ ( HSV-1)با استفاده از متیلنبلو و نور مرئی در پلاسما تمرکز دارد و اثربخشی غیر فعالسازی را با روشهای qRT-PCR و TCID50 مقایسه میکند.
مواد و روشها
سلول Vero در محیط DMEM با 1% پنیسیلین-استرپتومایسین و 10% سرم جنین گوساله در دمای 37 درجه سانتیگراد با 5% CO2 کشت داده شدند. تیتر ویروس با آلودهسازی این سلولها تعیین شد. متعاقب آن، ذخیره ویروس در حجم 0/1 پلاسما به آن اضافه شد. ویروس به پنج واحد پلاسمای جداگانه که از اهداکنندگان خون مختلف به دست آمده بود، اضافه شد. پنج نمونه پلاسمای حاوی ویروس با متیلن بلو ۱ میکرومولار تیمار شدند و سپس به مدت ۱۰ دقیقه در طول موج ۶۲۷ نانومتر تحت پرتودهی قرار گرفتند. تیتراسیون ویروس در پلیتهای ۹۶ چاهکی انجام شد و تیتر ویروس قبل و بعد از پرتودهی از طریق رقتهای سریالی 10 برابری با روش TCID50اندازهگیری شد. گروه کنترل شامل پلاسمای بدون ویروس، پلاسمای حاوی ویروس پرتودهی شده بدون متیلنبلو و پلاسمای حاوی متیلنبلو بدون پرتودهی بود. پس از استخراج RNA ازرقتها و ساخت cDNA ، بیان گلیکوپروتئین D با qRT-PCR اندازهگیری شد. تمامی آزمایشها 3 مرتبه تکرار گردید. در نهایت محاسبات آماری و تجزیه و تحلیل دادهها با نرمافزار 26 SPSS انجام شد و ضریب همبستگی پیرسون بین دو آزمایش محاسبه گردید.
یافتهها
قبل از غیر فعالسازی، تیتر ویروس با مشاهده اثرات سیتوپاتیک در سلولهای Vero به صورت TCID50/mL 107 تعیین شد. پس از غیرفعالسازی با متیلن بلو و پرتودهی، تیتر به TCID50/mL 102 کاهش یافت که نشاندهنده کاهش ۵ لگاریتمی است. میانگین چرخه آستانه (Ct) ژن گلیکوپروتئین D در کشتهای سلولی حاوی HSV-1 غیرفعال نشده (TCID50/mL 107(، 22/6 (22/6 Ct=) بود، در حالی که میانگین Ct ژن گلیکوپروتئین D در نمونههای پلاسما پس از غیرفعال شدن توسط متیلن بلو و نور مرئی (TCID50/mL 102)، 28 (28 Ct=)، بود . این نشان دهنده کاهش 15 برابری در بیان گلیکوپروتئین D است (0.001 =p).
نتیجه گیری
بین مقادیر لگاریتمی TCID50 و مقادیر Ct به دست آمده از روش qRT-PCR همبستگی مشاهده شد. روشهای مولکولی مبتنی بر بیان گلیکوپروتئین D (gD mRNA) ممکن است به عنوان یک رویکرد مفید برای تشخیص عفونت فعال HSV به کار گرفته شوند.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
ويروس شناسي
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
