فصلنامه پژوهشی خون

  چکید ه

  سابقه و هدف

  آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C ، یک پروتئین چندکاره با ارزش‌های ویژه در اهداف تشخیصی و تحقیقات پاتوفیزیولوژیک می‌باشد. اکثر این خواص مربوط به بخش هیدروفیل (آمینو اسید: 122-2) این آنتی‌ژن بوده و دسترسی به روشی برای تولید مقادیر انبوه از این پروتئین در فرم خالص و طبیعی، از اهمیت به سزایی برخوردار است. به این جهت با هدف همسانه‌‌سازی(کلونینگ ژن)، ابراز پروتئین با بازدهی بالا، تخلیص در فرم طبیعی و ارزیابی خواص ایمونوژنیک این بخش از پروتئین Core ویروس هپاتیت C در یک سیستم پروموتری T₇ تحت القا آرابینوز، مطالعه حاضر صورت پذیرفت.

  مواد وروش‌ها

  در این مطالعه تجربی، از روش PCR برای جداسازی ژن و از حامل pIVEX2.3 جهت کلونینگ ژن با استفاده از روش‌های مهندسی ژنتیک استفاده شد. آنالیزهای پروتئین توسط SDS-PAGE ، وسترن بلات و الیزا بر روی سرم بیماران HCV مثبت انجام شد و تخلیص پروتئین به روش کروماتوگرافی جذبی بر روی نیکل (Ni-NTA) صورت پذیرفت.

  یافته‌ها

  ژن مربوط به بخش هیدروفیل HCV Core با موفقیت و با ترادف صحیح، جداسازی و به‌طور مناسب در کاست بیانی کلون گردید. سیستم القا آرابینوز به‌طور مؤثر، پس از 3 ساعت، قابلیت تولید پروتئین نوترکیب با بازدهی mg/L 5/3 را داشته و پروتئین تولید شده به سهولت و دریک مرحله قابلیت تخلیص شدن تاحدود 80 درصد بر روی ستون جذبی Ni-NTA را دارا می‌باشد. پروتئین خواص آنتی ژنیک خود را در ساختمان طبیعی حفظ می‌نماید.

  نتیجه گیری

  در این مطالعه برای اولین بار نشان داده شده که سیستم القا آرابینوز به‌طور مؤثر، قابلیت کاربرد در تولید بخش هیدروفیل پروتئین Core را دارد و پروتئین تخلیص شده، احتمالاً در شرایط طبیعی از لحاظ ایمونولوژیک، قابلیت کاربرد برای اهداف تحقیقی و تشخیصی را داراست.