جلد 6، شماره 1 - ( بهار 1388 )
جلد 6 شماره 1 صفحات 11-1 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Habibi Roudkenar M, Halabian R, Shagerdi Esmaili N, Oodi A, Masroori N, Amirizadeh N, et al . Isolation, cloning and expression of recombinant . Sci J Iran Blood Transfus Organ 2009; 6 (1) :1-11
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-297-fa.html
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-297-fa.html
حبیبی رودکنار مهریار، حلبیان راحله، شاگردی اسماعیلی ناصر، اودی آرزو، مسروری ناصر، امیری زاده ناصر، و همکاران. و همکاران.. جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO. فصلنامه پژوهشی خون. 1388; 6 (1) :1-11
مهریار حبیبی رودکنار* 
، راحله حلبیان ، ناصر شاگردی اسماعیلی ، آرزو اودی ، ناصر مسروری ، ناصر امیری زاده ، کامران موسوی حسینی ، احمد قره باغیان ، حوری رضوان ، محمدعلی جلیلی
، راحله حلبیان ، ناصر شاگردی اسماعیلی ، آرزو اودی ، ناصر مسروری ، ناصر امیری زاده ، کامران موسوی حسینی ، احمد قره باغیان ، حوری رضوان ، محمدعلی جلیلی
چکیده: (22337 مشاهده)
جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO
راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری‌زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره‌باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9
چکیده
سابقه و هدف
فاکتور VII ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد. فاکتور VII در مسیر انعقادی نقش مهمی داشته و آغازگر مسیر خارجی انعقاد است. هدف اساسی این مطالعه جداسازی و کلونینگ فاکتور VII نوترکیب انسانی و بیان آن در رده سلولی یوکاریوتی CHO جهت بیان فاکتور VII نوترکیب(FVII) بود.
مواد وروش‌ها
مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. ابتدا cDNA ژن فاکتور VII از رده سلولی کبد انسان(HepG2) جدا شده و در وکتور(+) 1/3 pcDNA کلون شده سپس وکتور نوترکیب به داخل سلول‌های CHO ترانسفکت شد. در نهایت، یک کلون سلولی که به طور پیوسته فاکتور VII را بیان می‌کند تثبیت شد. بیان فاکتور VII نوترکیب توسط روش‌های RT-PCR ، الایزا، SDS-PAGE و وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین تایید فعالیت بیولوژیکی فاکتور VII نوترکیب توسط آزمایش PT و ایجاد لخته در پلاسمای فاقد فاکتور VII صورت گرفت.
یافته‌ها
نتایج به دست آمده نشان‌دهنده کلونینگ و بیان موفقیت‌آمیز ژن فاکتور VII بود. پس از 3 هفته کشت سلول‌های CHO در حضور جنتیسین، کلون سلول‌های پایدار به دست آمد. نتایج آزمایش‌های RT-PCR ، الایزا، SDS-PAGE و وسترن بلات حاصل از کلون‌ها، نشان‌دهنده بیان این پروتئین در رده سلولی CHO بود. کاهش 3 الی 4 برابری در زمان انعقاد نشان‌دهنده وجود فعالیت بیولوژیکی فاکتور VII نوترکیب بیان شده بود.
نتیجه گیری
سالانه حدود 4000 الی 6000 ویال(33600 تا 50400 میلی گرم) از این فرآورده وارد کشور می‌شود که دولت را متحمل هزینه بسیار بالایی می‌کند. بنابراین تولید فاکتور VII نوترکیب با استفاده از فناوری DNA نوترکیب در سطح آزمایشگاهی، می‌تواند اولین گام در راه فایق آمدن بر مشکلات فوق باشد.
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
