جلد 19، شماره 4 - ( زمستان 1401 )
جلد 19 شماره 4 صفحات 312-301 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Hadad deilami A, Salehi M, Shahabi M. Cloning and expression a-galactosidase in order to convert B to O blood group. Sci J Iran Blood Transfus Organ 2022; 19 (4) :301-312
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1450-fa.html
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1450-fa.html
حداد دیلمی افسانه، صالحی میترا، شهابی مجید. کلونینگ آنزیم آلفا گالاکتوزیداز با هدف تبدیل آنتی‌ژن B گروه خونی به آنتی‌ژن O. فصلنامه پژوهشی خون. 1401; 19 (4) :301-312
استادیار دانشکده علم زیستی دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شمال
چکیده: (1020 مشاهده)
چکیده
سابقه و هدف
کمبود گروههای خونی سیستم ABO یکی از مشکلات متداول مراکز انتقال خون در دنیا میباشد. هم ز‌مان با پیشرفت علم مهندسی ژنتیک و تخلیص پروتئینها، تبدیل آنتیژنهای A و B به آنتی‌ژن O و ایجاد گروه خونی واحد مطرح شد. هدف از این پژوهش، بیان ژن آلفا گالاکتوزیداز در میزبان پروکاریوتی E.coli با ایجاد تغییرات پس از ترجمه و در نهایت تبدیل آنتی‌ژن B گروه خونی به آنتی‌ژن O بود.
مواد و روش‌ها
در این مطالعه تجربی، ژن آلفا گالاکتوزیداز دانه قهوه که پس از بهینه‌سازی کدونها در پلاسمید pBHA حاوی جایگاه برش آنزیم‌های BamH1 و Nco1 کلون شده بود، در باکتری E.coli سویه TOP10 تکثیر و استخراج شد. ژن آلفا گالاکتوزیداز پس از برش با آنزیم‌های فوق و تخلیص روی ژل آگاروز مجدداً در پلاسمید بیانی pET-20b کلون شده و به باکتری E.coli سویه rosetta 2 (DE3) وارد شد. بیان ژن با استفاده از القاکننده IPTG انجام شد. وجود پروتئین تولیدی با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. آزمون عملکرد پروتئین نیز با توانایی تبدیل گلبولهای B به O ارزیابی شد.
یافته‌ها
وسترن بلات و SDS-PAGE وجود پروتئین در پری پلاسم باکتری را تائید کرد. آنزیم تخلیص شده توانست آنتی‌ژن B را به طور نسبی از گلبول قرمز حذف کرده و میزان آگلوتیناسیون با آنتیسرم B را به میزان زیادی کاهش دهد.
نتیجه گیری
بیان پروتئین یوکاریوتی در میزبان پروکاریوتی میتواند در تولید انبوه آنزیم گالاکتوزیداز برای کاربرد در مراکز انتقال خون کارگشا باشد. بهینه‌سازی شرایط مختلف بیان برای دستیابی به مقادیر کافی از آنزیم ضروری میباشد.
سابقه و هدف
کمبود گروههای خونی سیستم ABO یکی از مشکلات متداول مراکز انتقال خون در دنیا میباشد. هم ز‌مان با پیشرفت علم مهندسی ژنتیک و تخلیص پروتئینها، تبدیل آنتیژنهای A و B به آنتی‌ژن O و ایجاد گروه خونی واحد مطرح شد. هدف از این پژوهش، بیان ژن آلفا گالاکتوزیداز در میزبان پروکاریوتی E.coli با ایجاد تغییرات پس از ترجمه و در نهایت تبدیل آنتی‌ژن B گروه خونی به آنتی‌ژن O بود.
مواد و روش‌ها
در این مطالعه تجربی، ژن آلفا گالاکتوزیداز دانه قهوه که پس از بهینه‌سازی کدونها در پلاسمید pBHA حاوی جایگاه برش آنزیم‌های BamH1 و Nco1 کلون شده بود، در باکتری E.coli سویه TOP10 تکثیر و استخراج شد. ژن آلفا گالاکتوزیداز پس از برش با آنزیم‌های فوق و تخلیص روی ژل آگاروز مجدداً در پلاسمید بیانی pET-20b کلون شده و به باکتری E.coli سویه rosetta 2 (DE3) وارد شد. بیان ژن با استفاده از القاکننده IPTG انجام شد. وجود پروتئین تولیدی با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. آزمون عملکرد پروتئین نیز با توانایی تبدیل گلبولهای B به O ارزیابی شد.
یافته‌ها
وسترن بلات و SDS-PAGE وجود پروتئین در پری پلاسم باکتری را تائید کرد. آنزیم تخلیص شده توانست آنتی‌ژن B را به طور نسبی از گلبول قرمز حذف کرده و میزان آگلوتیناسیون با آنتیسرم B را به میزان زیادی کاهش دهد.
نتیجه گیری
بیان پروتئین یوکاریوتی در میزبان پروکاریوتی میتواند در تولید انبوه آنزیم گالاکتوزیداز برای کاربرد در مراکز انتقال خون کارگشا باشد. بهینه‌سازی شرایط مختلف بیان برای دستیابی به مقادیر کافی از آنزیم ضروری میباشد.
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
