[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: آرشيو مقالات :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: جلد 14، شماره 3 - ( پاییز 1396 ) ::
جلد 14 شماره 3 صفحات 227-236 برگشت به فهرست نسخه ها
همسانه‌سازی و بیان ژن نوترکیب CD40Lانسانی در رده سلولی HEK293
بهاره شکوهیان، دکتر زهره شریفی، دکتر مهشید محمدی پور، دکتر فاطمه یاری *
PhD ایمنی شناسی پزشکی دانشیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
چکیده:   (16 مشاهده)

چکیده
سابقه و هدف
CD40L ، پروتئینی غشایی و یکی از اعضای خانواده TNF است که نقش مهمی در انتقال پیام سلولی در ایمنی ذاتی و تطبیقی دارد. از آن جایی‌که این پروتئین نقش خود را از طریق تجمع گیرنده در سطح سلول هدف ایفا می‌کند، به ‌نظر می‌رسد فرم مالتی‌‌مری آن بتواند اثر قوی‌تری نسبت به فرم طبیعی ترایمری ایجاد کند. بر ‌این اساس در این مطالعه کلونینگ و بیان فرم کایمری و دودکامری CD40L محلول، از طریق پروتئین خود مالتی‌مر شونده سورفاکتانت پروتئین  (SP-D) D، در رده سلولی HEK293 مورد بررسی قرار گرفت.
مواد و روش‌ها
مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پروتئین SPD-CD40L به ‌صورت in silico طراحی و در پلاسمید pcDNA3.1(+) همسانه‌سازی شد. سلول‌های HEK293 به عنوان میزبان بیانی مورد استفاده قرار گرفته و ترانسفکت شدند. بیان CD40L نوترکیب در سطح RNA به وسیله RT-PCR بررسی شد. پس‌ از تخلیص پروتئین نوترکیب با روش کروماتوگرافی تمایلی، وزن مولکولی آن توسط SDS-PAGE تعیین گردید. به ‌منظور بررسی اختصاصیت پروتئین نیز از روش‌های ELISA وDot Blot  استفاده شد.
یافته‌ها
نتایج به دست آمده نشان‌دهنده ترانسفکشن سلول‌های HEK293 و بیان پروتئین نوترکیب پس از 24 و 48 ساعت از زمان ترانسفکشن بود. هم چنین نتایج حاصل از روش ELISA و Dot Blot بیانگر اختصاصیت پروتئین کایمری SPD-CD40L بود. 
نتیجه گیری
پروتئین کایمری SPD-CD40L از طریق وکتور بیانی pcDNA3.1(+) در رده سلولی یوکاریوتی HEK293 به­طور موفقیت­آمیز بیان شد و وزن مولکولی پروتئین 4-ترایمری(دودکامری) با مقدار مورد انتظار تطابق داشت.

 

واژه‌های کلیدی: کلمات کلیدی: CD40 لیگاند، رده سلولی HEK 293، ترانسفکشن
متن کامل [XPS 730 kb]   (8 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بيوتكنولوژي
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Shokoohian F, Sharifi Z, Mohammadi Pour M, Yari F. Cloning and Expression of Recombinant Human CD40L in HEK293 Cell line. Sci J Blood Transfus Organ. 2017; 14 (3) :227-236
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1114-fa.html
شکوهیان بهاره، شریفی زهره، محمدی پور مهشید، یاری فاطمه. همسانه‌سازی و بیان ژن نوترکیب CD40Lانسانی در رده سلولی HEK293. فصلنامه پژوهشی خون . 1396; 14 (3) :227-236

URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1114-fa.html

جلد 14، شماره 3 - ( پاییز 1396 ) برگشت به فهرست نسخه ها
فصلنامه پژوهشی خون Scientific Journal of Iran Blood Transfus Organ
The Scientific Journal of Iranian Blood Transfusion Organization - Copyright 2006 by IBTO
Persian site map - English site map - Created in 0.061 seconds with 790 queries by yektaweb 3461