fa همسانه‌سازی ژن SOX2 انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول‌های HEK293T بيوتكنولوژي Biotechnology پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> ژن </strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>در میان گونه‌ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول‌های پیش‌ساز از سلول‌های تمایز یافته می‌باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول‌های پیش‌ساز می‌شود. </strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>، </strong><strong><i>OCT4 </i></strong><strong>، </strong><strong><i>cMYC </i></strong><strong>و </strong><strong><i>KLF4 </i></strong><strong>سبب باز برنامه‌نویسی سلول‌های سوماتیک به سلول‌های بنیادی می‌شوند. امروزه از ژن </strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>در جهت تولید سلول­های </strong><strong>iPS </strong><strong>و سلول درمانی استفاده می‌شود. در این تحقیق همسانه‌سازی ژن </strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>در ناقل لنتی ویروس و آلوده‌سازی سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>بررسی شد. </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در یک مطالعه تجربی، توالی کدکننده ژن </strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>سنتز و در ناقل همسانه‌سازی </strong><strong>pUC57 </strong><strong>دریافت گردید. ژن ساختـه شده در ناقل بیانی لنتی ویروس </strong><strong>pLEX-MCS </strong><strong>ساب ـ کلون شد. سازه نوترکیب توسط روش‌‌های </strong><strong>PCR </strong><strong>، هضم آنزیمی و توالی‌یابی تایید شد. ذرات لنتی ویروس در سلول‌های تولید کننده </strong><strong>HEK293T </strong><strong>تولید شدند. از وکتور لنتی ویروسی حاوی ژن </strong><strong>GFP </strong><strong>به عنوان کنترل استفاده شد. سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>توسط ذرات ویروسی آلوده شده و به وسیله مقاومت به آنتی‌بیوتیک پورومایسین انتخاب گردیدند. بیان </strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>در سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>توسط </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>بررسی شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> سازه نوترکیب بیان‌کننده </strong><strong></strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>ساخته و تایید گردید. سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>توسط ذرات ویروس آلوده شدند و پس از 24 ساعت، بیش از 90% سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>بیان </strong><strong>GFP </strong><strong>را از خود نشان دادند. با استفاده از روش </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>بیان </strong><strong></strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>در سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>تایید شد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>با موفقیت سازه‌های نوترکیب را دریافت و ژن‌های </strong><strong>GFP </strong><strong>و </strong><strong></strong><strong><i>SOX2 </i></strong><strong>را بیان نمودند. </strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Recently the regenerative stem cell-based therapy has held great promise in treating severe degenerative diseases. <i>SOX2</i> gene is highly conserved among species and plays an important role in maintenance of self renewal capacity in stem cells. <i>SOX2</i> concomitant with OCT4, cMYC, and KLF4 is recruited to reprogram somatic cells towards stem cells. Today <i>SOX2</i> is frequently being used in induced pluripotent stem cells generation and desired cell based therapies. The aim of this study was to clone <i>SOX2</i> gene in lentiviral vector and evaluate HEK293T transduction. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In the present experimental study, the coding sequence of human <i>SOX2</i> gene was synthesized and received in pUC57 cloning vector. The synthesized cDNA was sub-cloned into pLEX- MCS Lentiviral vector. Lentiviral particles were produced in HEK293T cells and subsequently the HEK293T were transducted and infected cells were selected by their resistance to puromycin in the culture. Expression of <i>SOX2</i> was evaluated in infected HEK293 cells by using Real-Time PCR. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Constructs expressing <i>SOX2</i> gene were produced and confirmed. HEK293T was successfully transducted by lentiviral particles and after 24 hours more than 90% of HEK293T represented the expression of GFP. Real-Time PCR confirmed <i>SOX2</i> expression in infected HEK293 cells. </p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> HEK293T wase transducted and expressed GFP and <i>SOX2</i> successfully.</p><p>  </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p>  </p> کلمات کلیدی : فاکتور رونویسی SOX2 , وکتورهای کلونینگ, پروتئین‌های فلورسنت سبز Key words : SOX2 Transcription Factor, Cloning Vectors, Green Fluorescent Proteins 101 110 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-708-1&slc_lang=fa&sid=1 E. Darbari انسیه درباری 9100319475328460012641 9100319475328460012641 No تهران ـ ایران Z.S. Soheili زهرا سهیلا سهیلی soheili@nigeb.ac.ir 9100319475328460012642 9100319475328460012642 Yes تهران ـ ایران ـ صندوق پستی: 161/14965