fa همسانه سازی، بهینه‌سازی شرایط بیان، تخلیص و ارزیابی خواص ایمونولوژیک بخش هیدروفیلیک آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C، ابراز شده تحت پروموتر T7-araBAD در E.coli عمومى General پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> آنتی‌ژن </strong><strong>Core </strong><strong>ویروس هپاتیت </strong><strong>C </strong><strong>، یک پروتئین چندکاره با ارزش‌های ویژه در اهداف تشخیصی و تحقیقات پاتوفیزیولوژیک می‌باشد. اکثر این خواص مربوط به بخش هیدروفیل (آمینو اسید: 122-2) این آنتی‌ژن بوده و دسترسی به روشی برای تولید مقادیر انبوه از این پروتئین در فرم خالص و طبیعی، از اهمیت به سزایی برخوردار است. به این جهت با هدف همسانه‌‌سازی(کلونینگ ژن)، ابراز پروتئین با بازدهی بالا، تخلیص در فرم طبیعی و ارزیابی خواص ایمونوژنیک این بخش از پروتئین </strong><strong>Core </strong><strong>ویروس هپاتیت </strong><strong>C </strong><strong>در یک سیستم پروموتری </strong><strong>T₇ </strong><strong>تحت القا آرابینوز، مطالعه حاضر صورت پذیرفت. </strong></p><p> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در این مطالعه تجربی، از روش </strong><strong>PCR </strong><strong>برای جداسازی ژن و از حامل </strong><strong>pIVEX2.3 </strong><strong>جهت کلونینگ ژن با استفاده از روش‌های مهندسی ژنتیک استفاده شد. آنالیزهای پروتئین توسط </strong><strong>SDS-PAGE </strong><strong>، وسترن بلات و الیزا بر روی سرم بیماران </strong><strong>HCV </strong><strong>مثبت انجام شد و تخلیص پروتئین به روش کروماتوگرافی جذبی بر روی نیکل </strong><strong>(Ni-NTA) </strong><strong>صورت پذیرفت. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> ژن مربوط به بخش هیدروفیل </strong><strong>HCV Core </strong><strong>با موفقیت و با ترادف صحیح، جداسازی و به‌طور مناسب در کاست بیانی کلون گردید. سیستم القا آرابینوز به‌طور مؤثر، پس از 3 ساعت، قابلیت تولید پروتئین نوترکیب با بازدهی </strong><strong>mg/L </strong><strong>5/3 را داشته و پروتئین تولید شده به سهولت و دریک مرحله قابلیت تخلیص شدن تاحدود 80 درصد بر روی ستون جذبی </strong><strong>Ni-NTA </strong><strong>را دارا می‌باشد. پروتئین خواص آنتی ژنیک خود را در ساختمان طبیعی حفظ می‌نماید. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> در این مطالعه برای اولین بار نشان داده شده که سیستم القا آرابینوز به‌طور مؤثر، قابلیت کاربرد در تولید بخش هیدروفیل پروتئین </strong><strong>Core </strong><strong>را دارد و پروتئین تخلیص شده، احتمالاً در شرایط طبیعی از لحاظ ایمونولوژیک، قابلیت کاربرد برای اهداف تحقیقی و تشخیصی را داراست. </strong></p><strong>کلمات کلیدی : آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C ، Ni-NTA ، آرابینوز، پروموتر </strong> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> The capsid or core Ag of Hepatitis C virus is a multifunctional protein which has the principal pathogenesis and diagnostic role in HCV related infections and most of these properties are attributed to the hydrophilic section (amino acids 2-122) of this protein. For different research and diagnostic applications, high amounts of this protein in pure and original form are required. So, the aim of this study was to clone the gene, optimize the expression condition, purify it in the original form, and immunologically characterize hydrophilic section of HCV Core Ag, expressed by T7-araBAD promoter system in <i>E.coli</i>.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> The PCR amplified region corresponding to 2-122 section of this Ag from genotype Ib was cloned in pIVEX 2.3, a T7 promoter derived vector. The proper construct after digestional analysis and sequencing confirmations was transformed into BL21-AI <i>E.coli</i>, and protein expression under control of araBAD promoter by addition of 0.2% Arabinose was induced.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> After optimization of expression condition, purification of protein by NI-NTA agarose gel chromatography in native condition by immidazole yielded about 3.5mg/L of HCV core Ag. Immunological studies by western blotting through application of core specific mAbs and results of ELISA tests indicated that the protein is with desired immunological properties.</p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> AraBAD promoter can be perfectly utilized to produce the hydrophilic section of HCV core in high yields, and purification through NI-NTA in native condition may provide the antigen for different research and diagnostic applications.</p><p> <strong> </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i>Key words</i></strong><strong> : </strong>Hepatitis C core Antigen, Arabinose, NI-NTA, Promoter<strong> </strong></p> ,آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C,Ni-NTA,آرابینوز,پروموتر Hepatitis C core Antigen, Arabinose, NI-NTA, Promoter 223 231 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-85&slc_lang=fa&sid=1 Aghasadeghi M.R. محمدرضا آقا صادقی 9100319475328460011235 9100319475328460011235 No Sadat S.M. سید مهدی سادات 9100319475328460011236 9100319475328460011236 No Amini S. دکتر صفیه امینی 9100319475328460011237 9100319475328460011237 No Budkowska A. دکتر آگاتابود کوسکا 9100319475328460011238 9100319475328460011238 No Roohvand F. دکتر فرزین روحوند rFarzin@pasteur.ac.ir 9100319475328460011239 9100319475328460011239 Yes