fa چگونگی تکوین سلول‌های شبکیه از طریق انتقال ژن PAX6 به سلول‌های CD133+ به دست آمده از بند ناف انسان هماتولوژي Hematology پژوهشي Research <p align="right">  چکید ه </p><p align="right"> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p align="right"> <strong> سلول‌های بنیادی </strong><strong>CD133⁺ </strong><strong>بند ناف، زیر گروهی از سلول‌های خونساز را تشکیل می‌دهند. ثابت شده که این سلول‌ها از توانایی تمایز خوبی به سمت سلول‌های عصبی برخوردار هستند. ژن </strong><strong><i>PAX6 </i></strong><strong></strong><strong>جزیی از خانواده­ چند ژنی </strong><strong><i>PAX </i></strong><strong>و از فاکتور­های رونویسی است. ژن </strong><strong><i>PAX6 </i></strong><strong>ژن کنترل­کننده اصلی تکامل چشم و اندام­های حسی بافت­های اپیدرمی و عصبی می‌باشد. هدف از این مطالعه، بررسی روند تمایزی سلول‌های </strong><strong>CD133⁺ </strong><strong>به دست آمده از بند </strong><strong></strong><strong>ناف که ژن </strong><strong><i>PAX6(5a) </i></strong><strong>به آن‌ها انتقال یافته است بود. </strong></p><p align="right"> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p align="right"> <strong> در یک مطالعه تجربی، ابتدا سلول‌های تک هسته‌ای خون بند ناف به وسیله فایکول جدا شدند، سپس سلول‌های </strong><strong>CD133⁺ </strong><strong>موجود در آن با </strong><strong>روش </strong><strong>MACS </strong><strong>جدا‏‏‏‏‏ </strong><strong>‎ </strong><strong>‏‏ </strong><strong>‎ </strong><strong>‏ </strong><strong>‎ </strong><strong>‏‏‏ ‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏ </strong><strong>‎ْ </strong><strong>و در محیط کشت </strong><strong>Stem Span </strong><strong>کشت داده شدند. سپس به منظور ساخت ویروس، وکتور ناقل ژن </strong><strong><i>PAX6 </i></strong><strong>و وکتورهای کمکی( </strong><strong>pMD2G </strong><strong>، </strong><strong>psPAX2 </strong><strong>) </strong><strong>به سلول‌های </strong><strong>HEK293T </strong><strong>ترانسفکت شدند. پس از تغلیظ ویروس و تیتر کردن آن، سلول‌های </strong><strong>CD133⁺ </strong><strong>با تیتر مطلوب ویروس آلوده شدند. سلول‌های حاوی ویروس مورد نظر، از نظر وجود پروتئین‌های </strong><strong>PAX6 </strong><strong>، </strong><strong>Rhodopsin </strong><strong>، </strong><strong>Chx10 </strong><strong>، </strong><strong>Thy1 </strong><strong>و </strong><strong>Nestin </strong><strong></strong><strong>توسط روش ایمنوسایتوشیمی ارزیابی شدند. </strong></p><p align="right"> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p align="right"> <strong> پس از دو هفته پروتئین‌های </strong><strong>Thy-1 </strong><strong>، </strong><strong>Chx10 </strong><strong>، </strong><strong>Nestin </strong><strong>و </strong><strong>PAX6 </strong><strong></strong><strong>در سلول‌های آلوده شده بیان شدند. هم چنین بیان مارکرهای </strong><strong>Rhodopsin </strong><strong>و </strong><strong>Nestin </strong><strong>در سلول‌های کنترل مشاهده شد. </strong></p><p align="right"> <strong><i> نتیجه‌گیری </i></strong></p><p align="right"> <strong> نتایج حاصل از این مطالعه بیانگر تمایز سلول‌های </strong><strong>CD133⁺ </strong><strong>به سلول‌های پروژنیتوری عصبی و سلول‌های شبه عصبی شبکیه از جمله سلول‌های گانگلیونی می‌باشد. </strong></p><p align="right" style="DIRECTION: rtl"> <strong><i> </i></strong> <!--stripped--> </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Cord blood CD133⁺ stem cells are highly proliferative primitive hematopoietic progenitors. These cells can also differentiate to other cells especially neural cells. The <i>PAX6</i> gene belongs to a family of genes that play a critical role in the formation of tissues and organs during embryonic development. The PAX6 protein is thought to activate genes involved in the formation of the eyes, brain and spinal cord (central nervous system), and the pancreas. The purpose of this study was to assess<strong> </strong><i>PAX6 (5a)</i> gene transfer in cord blood CD133⁺ stem cells and evaluate its effect on differentiation. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In this experimental study, cord blood stem cells were collected and mononuclear cells isolated by ficoll then, CD133⁺ cells were obtained using the CD133 MicroBead Kit in combination with the autoMACS Separator. These cells were cultured in Stem Span media. Next, HEK293T packaging cells were co-transfected with PLEX-MCS, PsPAX2, and pMD2G by calcium phosphate method. Lentiviral vectors were collected and concentrated. The appropriate amount of viruses was used to infect CD133⁺ cells. The successful transduced cells were selected by puromycin resistance. After two weeks, the expression of Rhodopsin, CHX10, Thy1, Nestin, and PAX6 proteins was assessed by immunocytochemisrty method. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Two weeks after infection, the expression of Rhodopsin, CHX10, Thy1, Nestin, and <i>PAX6</i> proteins were detected in treatment cells and the expression of Rhodopsin and Nestin in control cells. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions </i></strong></p><p> The results showed CD133⁺ cells differentiated into progenitor neural like cells and retinal neural like cells including ganglion like cells.</p><p>  </p> کلمات کلیدی : پروتئین PAX6 , آنتی‌ژن CD133 , خون بند ناف Key words: PAX6 protein, CD133 antigen, Cord Blood 244 254 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-761-1&slc_lang=fa&sid=1 S. Balagholi سحر بالاقلی 9100319475328460012974 9100319475328460012974 No تهران ـ ایران S. Amini-Kafi Abad صدیقه امینی کافی‌آباد s.amini@ibto.ir 9100319475328460012975 9100319475328460012975 Yes تهران ـ ایران ـ صندوق پستی: 1157-14665 Z.S. Soheili زهرا سهیلا سهیلی 9100319475328460012976 9100319475328460012976 No تهران ـ ایران Sh. Samiee شهرام سمیعی 9100319475328460012977 9100319475328460012977 No تهران ـ ایران H. Ahmadiyeh حمید احمدیه 9100319475328460012978 9100319475328460012978 No تهران ـ ایران M. Rezaei Kanavi مژگان رضایی کنوی 9100319475328460012979 9100319475328460012979 No تهران ـ ایران M. Nikougoftar Zarif مهین نیکوگفتار ظریف 9100319475328460012980 9100319475328460012980 No تهران ـ ایران N. Daftarian نارسیس دفتریان 9100319475328460012981 9100319475328460012981 No تهران ـ ایران