fa تکثیر سلول‌های بنیادی خونساز CD34+ بند ناف در همکشتی با سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان در حضور TEPA سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> استفاده از سلول‌های بنیادی خونساز( </strong><strong>HSCs </strong><strong>)، روش استانداردی جهت درمان بسیاری از بدخیمی‌های خونی و اختلالات غیرخونی محسوب می‌شود. خون بند ناف، دارای مزایای فراوانی نسبت به سایر منابع سلول‌های بنیادی است و یکی از محدودیت‌های مهم این منبع جهت پیوند, تعداد محدود سلول‌های بنیادی آن می‌باشد. از راه‌کارهای پیشنهادی برای غلبه بر این مشکل، تکثیر بدون تمایز این سلول‌ها در محیط‌های کشت است. در این مطالعه از </strong><strong>TEPA </strong><strong>به عنوان شلاتور مس و سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان جهت تکثیر </strong><strong>UCB-HSCs </strong><strong>استفاده شد. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه انجام شده از نوع کاربردی بود. سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>خون بند ناف با استفاده از آنتی‌بادی‌های نشان‌دار با </strong><strong>Microbead </strong><strong>و ستون </strong><strong>MACS </strong><strong>جدا شدند. سپس این سلول‌ها در چهار شرایط کشت مختلف شامل: 1) محیط حاوی سایتوکاین 2) محیط دارای فیدر و سایتوکاین 3) محیط دارای </strong><strong>TEPA </strong><strong>و سایتوکاین و 4) محیط دارای فیدر, سایتوکاین و </strong><strong>TEPA </strong><strong>کشت داده شدند. به منظور ارزیابی تکثیر </strong><strong>HSCs </strong><strong>، از شمارش سلولی, تعیین درصد سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>به روش فلوسایتومتری و روش سنجش کلونی در روز 10 تکثیر استفاده شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> بیشترین میزان چند برابر شدن تعداد سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>, </strong><strong>TNC </strong><strong>ها و </strong><strong>CFU-C </strong><strong>در شرایط کشت چهارم(به ترتیب 3/15 </strong><strong>± </strong><strong>11/110, 78/21 </strong><strong>± </strong><strong>5/118 و 7/44 </strong><strong>± </strong><strong>9/172 برابر) در مقایسه با سایر شرایط مشاهده شد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> نتایج بررسی نشان داد که همکشتی </strong><strong>HSCs </strong><strong>با سلول‌های بنیادی مزانشیمی در حضور عامل شلاته‌کننده مس ( </strong><strong>(TEPA </strong><strong>، قادر است میزان تکثیر </strong><strong>UCB-HSCs </strong><strong>را به طور قابل توجهی افزایش دهد. بنابراین، این استرات‍ژی می‌تواند برای تکثیر </strong><strong>HSCs </strong><strong>مفید واقع شود. </strong></p><p>  </p> Abstract Background and Objectives Hematopoietic stem cells (HSCs) have become a standard protocol for the treatment of many hematologic malignancies and non-malignant disorders. Umbilical cord blood, as a source of HSCs, has many advantages compared to other sources. One major drawback in using this source in transplantation is the low HSC dose available. Ex vivo expansion of HSCs is a solution to overcome this limitation .In this study, we used TEPA, as a Cu chelator, and human bone marrow MSCs to investigate the expansion rate of UCB-HSCs. Materials and Methods CB-HSCs were isolated using miniMACS magnetic separation system. We cultured the enriched CD34+ cells in various conditions. Culture condition A, supplemented only with recombinant cytokines culture condition B, supplemented with BM-MSCs as a cell feeder layer and recombinant cytokines culture condition C, supplemented with recombinant cytokines and TEPA culture condition D, supplemented with recombinant cytokines, BM-MSCs as a cell feeder layer and TEPA. In order to evaluate the HSC expansion, we performed cell count, the analysis of CD34+ expression by flow cytometery, and CFU assay on day 10 after culture. Results The most fold increase rate in CD34+ cell, TNCs and CFU-C was observed in the culture condition D (110.11 ± 15.3, 118.5 ± 21 and 172.9 ± 44.7, respectively) compared to other conditions. Conclusions The results showed that co-culture of HSCs with BM-MSCs in the presence of copper chelating agent (TEPA) could dramatically increase the expansion rate of UCB-HSCs. Therefore, this strategy could be useful for HSC expansion. کلمات کلیدی: سلول‌های بنیادی خونساز, سلول‌های بنیادی مزانشیمی, TEPA Key words: Hematopoietic Stem Cells, Mesenchymal Stromal Cells, TEPA 353 363 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-631-1&slc_lang=fa&sid=1 N. Amirizadeh ناصر امیری‌زاده 910031947532846009262 910031947532846009262 No استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون F. Zaker فرهاد ذاکر 910031947532846009263 910031947532846009263 No استاد دانشکده پیراپزشکی ـ مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی ایران N. Nasiri ناهید نصیری nahid.nasiri64@yahoo.com 910031947532846009264 910031947532846009264 Yes دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوشم پزشکی تهران