fa غنی سازی کتابخانه نمایش فاژی علیه سلول های سرطانی سینه به منظور تولید آنتی بادی های تک دومینی شتری شناساگر فاکتور رشد اپیدرمالی 2 خون و انكولوژي Hematology and Oncology پژوهشي Research <p align="right">  چکید ه </p><p align="right"> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p align="right"> <strong> ریزش مارکرهای سرطانی مانند </strong><strong>HER2 </strong><strong>از سطح سلول‌های سرطانی سینه، باعث مخفی ماندن آن‌ها از دید سلول‌های ایمنی می‌گردد. افزایش غلظت </strong><strong>HER2 </strong><strong>محلول( </strong><strong>sHER2 </strong><strong>)، در نتیجه درمان سرطان سینه </strong><strong>HER2⁺ </strong><strong>و پاسخ به تراستوزومب، تاثیرگذار است. در همین راستا، آنتی‌بادی‌های تک دومینی شتری( </strong><strong>VHH </strong><strong>) به علت خصوصیات منحصر به فرد و توانایی بالا در شناسایی آنتی‌ژن، مواد هدفمند بسیار مؤثری در شناسایی </strong><strong>sHER2 </strong><strong>محسوب می‌گردند. </strong><strong></strong></p><p align="right"> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p align="right"> <strong> در یک مطالعه تجربی، کتابخانه فاژی به دست آمده از دو شتر ایمن با انجام </strong><strong>panning </strong><strong>بر روی سلول‌های سرطانی فاقد </strong><strong>HER2 </strong><strong>و بیان‌کننده </strong><strong>HER2 </strong><strong>، علیه آنتی‌ژن </strong><strong>HER2 </strong><strong>غنی گردید. میزان افینیتی چهار </strong><strong>VHH </strong><strong>به دست آمده به </strong><strong>HER2 </strong><strong>، شناسایی </strong><strong>sHER2 </strong><strong>و اتصال به </strong><strong>HER2 </strong><strong>بر روی سلول‌های سرطانی سینه توسط </strong><strong>VHH </strong><strong>ها با الایزا مورد بررسی قرار گرفت. </strong></p><p align="right"> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p align="right"> <strong> بعد از انجام </strong><strong>panning </strong><strong>بر روی سلول و </strong><strong></strong><strong>الایزا، چهار </strong><strong>VHH </strong><strong>با اتصال قابل ملاحظه به </strong><strong>HER2 </strong><strong>در مقایسه با کنترل منفی شناسایی شدند. </strong><strong>VHH </strong><strong>های با افینیتی ^1- </strong><strong>M </strong><strong>10¹³-10¹²، توانایی بالایی نیز در شناسایی </strong><strong>sHER2 </strong><strong>(2 میکروگرم در میلی لیتر) نشان دادند. در اتصال به </strong><strong>HER2 </strong><strong>در سطح سلول، آنتی‌بادی‌های( </strong><strong>VHH </strong><strong>) ₄ </strong><strong>RR </strong><strong>و ₆ </strong><strong>RR </strong><strong>بالاترین میزان اتصال(به ترتیب 33/0 </strong><strong>± </strong><strong>2 و 15/0 </strong><strong>± </strong><strong>5/2) به سلول </strong><strong>SKBR3 </strong><strong>(بیان‌کننده </strong><strong>HER2 </strong><strong>) </strong><strong></strong><strong>را در مقایسه با سلول فاقد </strong><strong>HER2 </strong><strong>(به ترتیب 17/0 </strong><strong>± </strong><strong>38/0 و 12/0 </strong><strong>± </strong><strong>4/0) نشان دادند. </strong></p><p align="right"> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p style="DIRECTION: rtl" align="right"> <strong> استفاده از </strong><strong>VHH </strong><strong>های اختصاصی </strong><strong>HER2 </strong><strong>برای سنجش </strong><strong>sHER2 </strong><strong>به عنوان بیومارکر، ارزیابی مناسبی از وضعیت </strong><strong>HER2 </strong><strong>در تومور اولیه و متعاقباً پاسخ به درمان می‌دهد. </strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Breast cancer cells can be hidden from immune cells by shedding tumor markers such as HER2. The increased soluble HER2 (sHER2) concentrations are associated with the outcome of HER2-positive breast cancer and sensitivity to trastuzumab treatment. To this end, camelid single domain antibodies (VHH) with unique properties and binding ability are very striking targeting agents to detect sHER2. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> By panning on HER2 negative and positive cells, an immune camel library was enriched against HER2 antigen. Affinity and specificity of four selected VHHs to HER2, detection of sHER2 and binding of selected VHHs to HER2 on breast cancer cells were investigated by ELISA.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> After cell panning and ELISA, four VHHs that recognized HER2 antigen better than negative control were identified. High affinity HER2 specific VHHs (1012-1013 M-1) were able to detect sHER2 (2 µg/ml). When the mixture of VHH and sMUC1 was added to HER2 coated-well, the VHH bound to HER2. RR₄ and RR₆ VHHs showed the highest binding to SKBR3 (HER2 expressing cell) (2 ± 0.33 and 2.5 ± 0.15, respectively) compared to HER2 negative cell (0.38 ± 0.17 and 0.4 ± 0.12, respectively).</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> The HER2 status of a primary tumor and responses to treatment can be evaluated by measuring sHER2 as a biomarker by HER2 specific VHHs. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p>  </p><p>  </p> کلمات کلیدی : ژن‌ها, HER2 , سرطان سینه Key words : Genes ٬ HER-2, Breast Cancer 126 136 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-592-1&slc_lang=fa&sid=1 F. Rahimi Jamnani فاطمه رحیمی جمنانی 910031947532846008904 910031947532846008904 No استادیار مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی انستیتو پاستور ایران F. Rahbarizadeh فاطمه رهبری‌زاده Rahbarif@modares.ac.ir 910031947532846008905 910031947532846008905 Yes دانشیار گروه بیوتکنولوژی پزشکی ـ دانشگاه تربیت مدرس M.A. Shokrgozar محمد علی شکرگزار 910031947532846008906 910031947532846008906 No دانشیار بانک سلولی انستیتو پاستور ایران D. Ahmadvand داوود احمدوند 910031947532846008907 910031947532846008907 No استادیار دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی تهران F. Mahboudi فریدون مهبودی 910031947532846008908 910031947532846008908 No دانشیار مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی انستیتو پاستور ایران