fa میزان بیان ژن vWF در بیماران و ناقلین فون‌ویلبراند نوع 3 با روش Real-time RT PCR هماتولوژي Hematology پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> بیماری فون‌ویلبراند، شایع‌ترین اختلال خونریزی‌دهنده ارثی است که در نتیجه نقص و ساختار غیر طبیعی فاکتور فون‌ویلبراند ایجاد می­شود. این فاکتور که نقش اساسی در انعقاد خون بازی می‌کند، توسط ژن </strong><strong><i>vWF </i></strong><strong>کد می‌شود. نوع 3 ، وخیم‌ترین فرم بیماری است که دارای توارث اتوزومال مغلوب می­باشد. هدف از پژوهش حاضر، بررسی اثر موتاسیون‌های مختلف ژن </strong><strong><i>vWF </i></strong><strong>بر بیان </strong><strong>mRNA </strong><strong>در افراد مبتلا به بیماری فون‌ویلبراند بود. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در یک مطالعه کاربردی، نمونه خون افراد مبتلا از میان گروهی از بیماران که جهش­های آنان قبلا" شناسایی شده بود، گرفته شد. به منظور بررسی سطح بیان ژن </strong><strong><i>vWF </i></strong><strong>، پلاکت‌های خون محیطی جداسازی شد و استخراج </strong><strong>RNA </strong><strong>از آن‌ها صورت پذیرفت. سپس با استفاده از روش </strong><strong>Real-time RT PCR </strong><strong>بر روی نمونه‌های </strong><strong>cDNA </strong><strong>پلاکتی، بیان ژن </strong><strong></strong><strong><i>vWF </i></strong><strong>در تمام افراد بیمار و ناقل مورد ارزیابی قرار گرفت. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> بررسی افراد خانواده‌ای که واجد جهش بی­معنی در اگزون 35 بودند، نشان داد که فرد بیمار هموزیگوت در مقایسه با افراد هتروزیگوت خانواده، بیان بسیار کمتری از ژن </strong><strong><i>vWF </i></strong><strong>را دارا می‌باشد(005/0 </strong><strong>p= </strong><strong>). مطالعه در خانواده دوم که دارای بیمارانی با جهش هموزیگوت جایگاه پیرایش واقع در اگزون 10 بودند، مشخص کرد که بیان ژن </strong><strong><i>vWF </i></strong><strong>در افراد بیمار و ناقل تفاوت معناداری ندارد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> هر جهش اثر خاص خود را بر بیان ژن می­گذارد. تحقیقات نشان داده حتی جهش­هایی که از نظر ماهیت مشابه هستند، می­توانند اثرات مختلفی بر بیان ژن داشته باشند. مکانیسم </strong><strong>NMD </strong><strong>یکی از روندهایی است که می‌تواند در این انتخاب برای تخریب نقش داشته باشد. </strong></p><p>  </p> <p> <strong><i> vWF </i></strong><strong>gene expression analysis in type3 von willebrand </strong></p><p> <strong> affected patients using real-time PCR </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i>Zakiani Roudsari M.¹, Shahbazi Sh.², Mahdian R.³, Baniahmad F.³, Omidinia E.³ </i></strong></p><p> <strong><i></i></strong></p><p> <i> </i></p><p> <i>¹</i><i>Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran </i></p><p> <i>²</i><i>Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran </i></p><p> <i>³</i><i>Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran </i></p><p>  </p><p> <strong> </strong></p><p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> von Willebrand Disease (<i>vWD</i>) is the most common inherited haemorrhagic abnormality. The disease is caused by deficiency of von Willebrand Factor (<i>vWF</i>). <i>vWF</i> is encoded by <i>vWF</i> gene and <i>vWD</i> type3 is the severest form of the disease inherited in autosomal recessive pattern. In the present study, the impact of various <i>vWF</i> gene mutations on mRNA expression was investigated in <i>vWD</i> patients. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> Blood samples were obtained from <i>vWD</i> patients with known mutations to determine the <i>vWF</i> gene expression level. Peripheral blood platletes were isolated and the total RNA was extracted. To evaluate the <i>vWD</i> gene expression of patients and carriers, the quantitative real-time PCR of the platelet cDNAs was performed.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Patients in families with the nonsense mutation in exon 35 showed significantly lower levels of <i>vWF</i> mRNA compared to the hetrozygote carriers of the mutation and normal controls (p=0.005). However, there was no significant difference between <i>vWF</i> mRNA levels in patients and carriers in the other families who had splice site mutation in exon 10 (p=0.288). The impact of the mutation on the protein synthesis and function has yet to be investigated.</p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> Each mutation in <i>vWF</i> gene has its particular impact on the gene expression. It has been shown that even mutations of the same type may have different effects on mRNA expression. Evaluation of cDNA is not applicable in the cases in which the mRNA is affected by NMD pathway.</p><p> <strong> </strong></p> کلمات کلیدی : بیماری فون‌ویلبراند, بیان ژن, فاکتور فون ویلبراند Key words: von Willebrand Diseases, Gene Expression, von Willebrand Factor 391 398 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-251-5&slc_lang=fa&sid=1 M. Zakiani Roudsari مهشید زکیانی رودسری 910031947532846009713 910031947532846009713 No دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات ـ گروه زیست‌شناسی Sh. Shahbazi شیرین شهبازی sh.shahbazi@modares.ac.ir 910031947532846009714 910031947532846009714 Yes استادیار دانشکده پزشکی دانشگاه تربیت مدرس R. Mahdian رضا مهدیان 910031947532846009715 910031947532846009715 No استادیار مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی ـ انستیتو پاستور ایران F. Baniahmad فرزاد بنی‌احمد 910031947532846009716 910031947532846009716 No مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی ـ انستیتو پاستور ایران E. Omidinia اسکندر امیدی‌نیا 910031947532846009717 910031947532846009717 No انستیتو پاستور ایران