fa تشخیص غیر تهاجمی ژنوتایپ RhD جنین انسان از نمونه سرم مادران RhD- منفی با استفاده از Hemi-nested PCR عمومى General پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> آنتی‌ژن </strong><strong>RhD </strong><strong>در ایجاد بیماری‌های همولیتیک نوزادان نقش مهمی دارد و از آن‌جایی که تعیین </strong><strong>RhD </strong><strong>جنین با استفاده از روش‌های تهاجمی مانند آمنیوسنتز، خطراتی را برای مادر و جنین به دنبال خواهد داشت، در این پژوهش تلاش گردید تا ژنوتایپ </strong><strong>RhD </strong><strong>جنین از </strong><strong>DNA </strong><strong>آزاد جنینی موجود در سرم مادران باردار، به صورت غیر تهاجمی و با استفاده از روش </strong><strong>Hemi-nested PCR </strong><strong>تعیین گردد. </strong></p><p> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه انجام شده از نوع تجربی </strong><strong>(experimental) </strong><strong>بود. نمونه‌های خون 45 مادر باردار </strong><strong>RhD </strong><strong>- منفی که همسر </strong><strong>RhD </strong><strong>- مثبت داشتند جمع‌آوری شد و </strong><strong>DNA </strong><strong>آزاد سرم آن‌ها با روش فنل کلروفرم استخراج گردید. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و در دو دور </strong><strong>PCR </strong><strong>، قطعه‌ای از اگزون 10 ژن </strong><strong>RhD </strong><strong>تکثیر شد. برای تایید نتایج منفی حاصله بر روی نمونه‌های مادران باردار حامل جنین </strong><strong>RhD </strong><strong>- منفی، با استفاده از آغازگرهای اختصاصی قطعه‌ای از ژن دیگری به نام </strong><strong>RhCE </strong><strong>تکثیرگردید. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> پس از تولد، پیگیری انجام شده در ردیابی نتایج سرولوژیکی بند ناف نوزادان و ارزیابی نتایج حاصل از این پژوهش مشخص نمود که در 37 مورد از 41 نمونه قابل پیگیری، </strong><strong>RhD </strong><strong>جنین به میزان 45/95% به درستی تعیین شده ‌است. نتایج مربوط به 4 نمونه باقیمانده شامل یک مورد منفی کاذب و سه مورد مثبت کاذب بوده‌ است. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> این پژوهش نشان داد که برای تشخیص پیش از تولد گروه خونی </strong><strong>RhD </strong><strong>جنین به روش غیر تهاجمی و با کمترین احتمال خطر برای نوزاد، نمونه‌های سرمی مادران بسیار مناسب است. در این ارتباط استفاده از روش‌های جدید و حساس مولکولی مانند روش </strong><strong>Hemi-nested PCR </strong><strong>و به دست‌آوردن درصد بالایی از میزان تشخیص ژنوتایپ </strong><strong>RhD </strong><strong>این امیدواری را به ارمغان می‌آورد که با حذف تمام عوامل مداخله‌گر و تکمیل این روش، می‌توان این تشخیص را با اطمینان بالایی در کلینیک به کار برد. </strong></p><strong><i>کلمات کلیدی </i>: بارداری، سرم ، RhD ، RhCE ، PCR </strong> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> RhD antigen has an important role in causing hemolytic diseases in newborns in testing fetal RhD status by an invasive method such as amniocentesis, it would also harm the fetus and mother. This study tried to detect fetal RhD genotype using free fetal DNA in maternal serum by a noninvasive method using hemi-nested PCR.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> Blood samples were collected from 45 RhD- negative pregnant women whose spouses were Rh-positive the women's serum free DNAs were isolated by Phenol-Chloroform method. The exon 10 of the RhD genes was amplified in two rounds of PCR using special primers. For confirmation of negative results obtained in the second PCR, the fragment of the RhCE gene was amplified using special primers. </p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Follow up and evaluation of the PCR results and relevant serological analysis of cord blood after delivery revealed that in 37 out of 41 cases the RhD had been determined appropriately (95.45%). There were one false-negative and three false-positive cases.</p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> This study showed that maternal serum is very suitable for prenatal diagnosis of fetal RhD using noninvasive methods with minimum risk for neonates. In this regard, modern molecular methods with high sensitivity such as hemi-nested PCR and elimination of interfering factors could be applicable in clinical approaches. </p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i>Key words</i></strong><strong><i> : </i></strong><strong></strong>Pregnancy , Serum, RhD, RhCE, PCR<strong> </strong></p> ,بارداری,سرم,RhD,RhCE,PCR Pregnancy , Serum, RhD, RhCE, PCR 93 100 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-69&slc_lang=fa&sid=1 F Rahmdani فرزانه رهمدانی 9100319475328460010781 9100319475328460010781 No S.A Mesbah-Namin دکتر سید علیرضا مصباح mesbahnamin@yahoo.com 9100319475328460010782 9100319475328460010782 Yes T Tarihi دکتر تقی طریحی 9100319475328460010783 9100319475328460010783 No