fa اثر داربست «آلوگرافت استخوانی معدنی شده» با پوششی از سلول‌های استرومال خون بند ناف، بر تکثیر برون تن سلول‌های بنیادی خونساز CD34+ سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> خون بند </strong><strong></strong><strong>ناف( </strong><strong>UCB </strong><strong>) </strong><strong></strong><strong>در پیوند مغز </strong><strong></strong><strong>استخوان، به علت دوز پایین سلول </strong><strong>­ </strong><strong>های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>دارای محدودیت­هایی است که می­بایست این سلول­ها تکثیر شوند. بنابراین هدف از این تحقیق، تکثیر سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>با کمترین دست‌ورزی می‌باشد. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در یک مطالعه تجربی، سلول­های بنیادی سوماتیک غیر محدود شده( </strong><strong>USSC </strong><strong>) جفت </strong><strong></strong><strong>انسانی </strong><strong></strong><strong>جداسازی </strong><strong></strong><strong>و </strong><strong></strong><strong>از نظر </strong><strong></strong><strong>مورفولوژیکی </strong><strong></strong><strong>و </strong><strong></strong><strong>ایمونولوژیکی </strong><strong></strong><strong>شناسایی </strong><strong></strong><strong>و </strong><strong></strong><strong>تایید شدند. سپس روی داربست آلوگرافت استخوانی معدنی شده( </strong><strong>MBA </strong><strong>) و نیز کف پلیت، به عنوان لایه مغذی( </strong><strong>Feeder </strong><strong>) پوشانده شدند. سلول­های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>(با روش </strong><strong>(MACS </strong><strong>از </strong><strong></strong><strong>جفت انسانی تخلیص و به مدت سه هفته در شرایط دو و سه­ بعدی تکثیر شدند. در آخر شمارش سلولی، فلوسیتومتری، سنجش کلنی و نیز آزمایش </strong><strong>LTC-IC </strong><strong>انجام شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> پس از سه هفته تکثیر، تعداد سلول­های </strong><strong>UCB-CD34⁺ </strong><strong>در محیط سه ­بعدی، به 2/13 </strong><strong>± </strong><strong>250 رسید. بیشترین کاهش درصد فلوسیتومتری در کشت سه­ بعدی مشاهده شد و بیشترین تعداد کلنی و </strong><strong>LTC-IC </strong><strong>در روز 14 حاصل شد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> سلول­های </strong><strong>USSC </strong><strong>به همراه ساختار سه ­بعدی </strong><strong>MBA </strong><strong>، با تولید بیشتر سیتوکاین­های خونی، ماتریکس خارج سلولی، مولکول­های اتصالی و نیز با ایجاد برهمکنش­های بین سلولی می‌توانند به عنوان لایه مغذی مناسب به کار روند. این ساختار با افزایش نسبت سطح به حجم، تقلیدی از نیچ مغز استخوان در محیط خارج بدن را فراهم می­سازد. این مدل می­تواند محیط مناسب و جایگزینی برای تکثیر </strong><strong>HSC </strong><strong>باشد. </strong></p> <p> <i> </i></p><p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Bone marrow transplantation with umbilical cord blood (UCB) in adult recipients is limited mainly by a low CD34⁺ cell dose. To overcome this shortcoming by minimum manipulation, mineralized bone allograft (MBA) scaffold coated by UCB-USSC (unrestricted somatic stem cells) was used to expand CD34⁺ cells from UCB. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In this experimental study, UCB-USSCs were isolated and characterized by morphologic and immunophenotypical analysis. Then they were seeded on MBA (for 3D figuration) and culture plate (for 2D figuration) as a feeder layer. CD34⁺ cells were isolated from the UCB (by MACS method) and were expanded in 2D and 3D conditions for 3 weeks. At the end, cell count, flow cytometry, cologenic assay, and LTC-IC were done.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> After 3 weeks, <i>ex vivo</i> expansion of UCB-CD34⁺ was enhanced 250 ± 13.2 in 3D. The highest CFC expansion and LTC-IC were observed at day 14. Flow cytometry analysis showed the lowest percentage in 3D culture.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> USSCs by 3D MBA structure produce the hematopoietic cytokine, extracellular matrix and binding molecules they also create the intercellular interaction that can be used as a suitable feeder layer. It provides an <i>ex vivo</i> mimicry of bone marrow niche by enhancing surface/volume ratio. This model could be a suitable and alternative environment for HSCs expansion and hematopoiesis.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p>  </p> کلمات کلیدی : داربست آلوگرافت استخوانی معدنی شده, سلول‌های بنیادی خونساز, خون بند ناف, آلوگرافت Key words : MBA, Hematopoietic Stem Cells, Umblical Cord Blood, Allograft 199 213 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-250-4&slc_lang=fa&sid=1 Z.S. Hashemi زهراالسادات هاشمی 910031947532846009599 910031947532846009599 No دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربت مدرس ـ تهران ـ ایران M. Forouzandeh Moghadam مهدی فروزنده مقدم foroz@modares.ac.ir 910031947532846009600 910031947532846009600 Yes دانشیار دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس M. Soleimani مسعود سلیمانی 910031947532846009601 910031947532846009601 No دانشیار دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس ـ تهران ـ ایران Gh. Khamisipour غلامرضا خمیسی‌پور 910031947532846009602 910031947532846009602 No استادیار دانشگاه علوم پزشکی بوشهر ـ ایران M. Mossahebi Mohammadi مجید مصاحبی محمدی 910031947532846009603 910031947532846009603 No دانشکده پزشکی دانشگاه تربیت مدرس ـ تهران ـ ایران