fa بررسی اثر آنتی‌بادی‌های منوکلونال ضد پلاسمینوژن انسانی A5E10 ,A4D10 و A3B2 بر سیستم فیبرینولیز عمومى General پژوهشي Research چکیده <p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> اصلی‌ترین ترکیب سیستم فیبرینولیز، پیش‌آنزیم پلاسمینوژن می‌باشد که توسط فعال‌کننده‌های مختلفی به فرم فعال خود یعنی آنزیم پلاسمین تبدیل شده و نقش حیاتی خود را که همانا لیز لخته‌های فیبرینی است ایفا می‌کند. نخستین آنتی‌بادی منوکلونال ضد پلاسمینوژن انسانی در سال 1982 توسط پلوپلیس تهیه و اثر آن مطالعه شد. از آن ‌زمان‌ تاکنون ‌محققین ‌متعددی‌ در نقاط‌ مختلف‌ دنیا ‌به ‌تهیه ‌و مطالعه‌ آنتی‌بادی‌های ‌ضد پلاسمینوژن همت‌گماشته‌اند که‌ حاصل‌ تحقیقات‌آن‌ها قابل‌ توجه ‌بوده ‌و زوایای‌ تاریکی ‌از دانش‌ ما را در مورد ساختمان ‌و مکانیسم ‌فعال‌شدن پلاسمینوژن، ‌وضعیت‌ فیزیولوژیک ‌فیبرینولیزو غیره روشن ساخته‌اند. در این تحقیق، اثرات احتمالی سه آنتی‌بادی منوکلونال ضد پلاسمینوژن انسانی </strong><strong>A₄D₁₀, A₅E₁₀ </strong><strong>و </strong><strong>A₃B₂ </strong><strong>بر سیستم فیبرینولیز و مکانیسم احتمالی اثر آن مورد مطالعه قرار گرفت. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> پس از طی مراحلی نظیر کشت سلول‌های هیبریدومای تولید کننده آنتی‌بادی، تزریق این سلول‌ها به صفاق موش، تهیه آسیت و تخلیص آنتی‌بادی‌ها از آن، با روش‌های مختلفی از جمله ارزیابی چشمی لیز لخته پلاسمایی در حضور آنتی‌بادی‌ها، اندازه‌گیری کمی قطعات </strong><strong>DD/E </strong><strong>به روش آزمون </strong><strong>D </strong><strong>ـ دایمر، ارزیابی به روش الیزا با استفاده از سوبسترای سنتتیک </strong><strong>S-2251 </strong><strong>و غیره اثر این آنتی‌بادی‌ها بررسی شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> مشاهدات اولیه با استفاده از پلاسمای پولد انسانی نشان داد که دو آنتی‌بادی </strong><strong>A₅E₁₀ </strong><strong>و </strong><strong>A₄D₁₀ </strong><strong>در حضور فعال‌کننده‌های پلاسمینوژن </strong><strong>t-PA </strong><strong>، </strong><strong>u-PA </strong><strong>و </strong><strong>SK </strong><strong>، فعالیت سیستم فیبرینولیز را افزایش می‌دهند در حالی‌که آنتی‌بادی </strong><strong>A₃B₂ </strong><strong>در حضور این فعال‌کنند‌ه‌ها تأثیری بر سرعت فیبرینولیز ندارد. براساس نتایج به‌دست آمده از اندازه‌گیری کمی قطعات </strong><strong>DD/E </strong><strong>به روش آزمون </strong><strong>D </strong><strong>ـ دایمر، اثر افزایشی آنتی‌بادی‌های </strong><strong></strong><strong>A₄D₁₀ </strong><strong>و </strong><strong>A₅E₁₀ </strong><strong>به‌صورت وابسته به دوز است. در آزمون دیگری که توسط سوبسترای سنتتیک </strong><strong>S-2251 </strong><strong>انجام گرفت مشخص شد که فعال شدن پلاسمینوژن در حضور اوروکیناز و در نتیجه شکسته شدن این سوبسترا در حضور آنتی‌بادی‌های </strong><strong>A₅E₁₀ </strong><strong>و </strong><strong>A₄D₁₀ </strong><strong>افزایش می‌یابد. به علاوه بی‌اثر بودن آنتی‌بادی </strong><strong>A₃B₂ </strong><strong>بر فعال شدن پلاسمینوژن در این آزمون نیز تأیید شد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه‌گیری </i></strong></p><p> <strong> احتمالا آنتی‌بادی‌های </strong><strong>A₄D₁₀ </strong><strong>و </strong><strong></strong><strong>A₅E₁₀ </strong><strong><sub /></strong><strong>با باز کردن فرم ساختاری پلاسمینوژن، فعال شدن آن‌ را در مقابل فعال‌کننده‌های پلاسمینوژن تسهیل می‌کنند. </strong></p><p> <strong><i> کلمات کلیدی: </i></strong><strong></strong><strong>فیبرینولیز، پلاسمینوژن، آنتی‌بادی منوکلونال، فعال‌کننده‌های پلاسمینوژن </strong></p> <p> <strong>Abstract</strong></p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i> Background and Objectives </i></strong></p><p> The most important component of fibrinolytic system is the proenzyme plasminogen that through various activators is converted to its active form plasmin and performs its vital functions that is fibrin clot lysis. The first anti human plasminogen antibody was prepared by Ploplis in 1982 and its effect was studied. Since then many researchers have attempted to prepare and study anti plasminogen antibodies to elucidate important aspects of structure and activation mechanism of plasminogen , physiologic condition of fibrinolysis, etc. In the present study, we studied the probable effects of three antihuman plasminogen monoclonal antibodies A₄D₁₀, A₅E₁₀ and A₂C₈ on the activation of the fibrinolytic system. </p><p>  </p><p> <strong><i> Materials and Methods </i></strong></p><p>  After separate steps like the culture of antibody-producing hybridoma cells, their injection to mice, extraction of the ascites fluid and purification of antibodies were taken, various methods such as optical evaluation of plasma clot lysis in the presence of antibodies, quantitative measurement of DD/E in D-dimer assay, evaluation with ELIZA assay using S-2251 synthetic substrate lysis and the like were used to study the effects of thses antibodies. </p><p>  </p><p> <strong><i> Results </i></strong></p><p>  Primary observations with human pooled plasma showed that in the presence of plasminogen activators (t-PA, u-PA and SK), A₅E₁₀ and A₄D₁₀ can enhance activation of fibrinolytic system, but A₃B₂ has no effect on this system. According to D- dimer assay, it was shown that the lytic effects of A₅E₁₀ and A₄D₁₀ antibodies were dose dependent the higher the amount of antibodies, the lower their effects. The other test performed with S-2251 synthetic substrate showed plasminogen activation in the presence of Urokinase therefore, lysis of this substrate enhanced in the presence of A₅E₁₀ and A₄D₁₀ antibodies. Moreover, in this test ineffectiveness of A3B2 on plasminogen activation was confirmed <strong>. </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i> Conclusions </i></strong></p><p>  In conclusion, we suggested A₄D₁₀ and A₅E₁₀ antibodies by modification of structural from of plasminogen facilitate its activation in presence of plasminogen activators. </p><p>  </p><p> <strong><i> Key words </i></strong><i>: </i>Fibrinolytic, Plasminogen, Monoclonal antibody, Plasminogen activators<i> </i></p> ,فیبرینولیز,پلاسمینوژن,آنتی‌بادی منوکلونال,فعال‌کننده‌های پلاسمینوژن Fibrinolytic, Plasminogen, Monoclonal antibody, Plasminogen activators 29 36 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-63&slc_lang=fa&sid=1 A Maleki علی ملکی Ali Hematologist@yahoo.com 9100319475328460010761 9100319475328460010761 Yes M Mirshahi دکتر منوچهر میرشاهی 9100319475328460010762 9100319475328460010762 No A.A Pourfathollah دکتر علی‌اکبر پورفتح‌اله 9100319475328460010763 9100319475328460010763 No