fa مقایسه حساسیت دو روش Real-time PCR و ARMS PCR در تشخیص جهش شایع Q793X ژن vWF در مبتلایان به بیماری فون ویلبراند نوع 3 هماتولوژي Hematology پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> بیماری فون ویلبراند نوع 3 ، یک بیماری ارثی همراه با علایم خونریزی‌دهنده می‌باشد. این بیماری با توارث اتوزومال مغلوب در مناطقی که نرخ ازدواج‌های خویشاوندی بالا است، شیوع بیشتری نشان می‌دهد. نشان داده شده است که جهش </strong><strong>Q793X </strong><strong>ایجادکننده بیماری فون‌ویلبراند نوع 3، در اگزون 18 فراوانی بیشتری در جمعیت ایرانی دارد. لذا به منظور بررسی جهش مذکور در بیماران ایرانی، دو روش مولکولی جدید به کار گرفته شد. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه از نوع توصیفی بود. وجود جهش ژنتیکی </strong><strong>Q793X </strong><strong>در 15 بیمار و 30 فرد نرمال بررسی شد. از دو روش </strong><strong>ARMS-PCR </strong><strong>و </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>برای بررسی جهش استفاده شد. پس از انجام واکنش </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>، الگوی منحنی‌های ذوب نیز بررسی و به منظور تایید نتایج آزمایش‌ها، نمونه محصول </strong><strong>PCR </strong><strong>بیماران تعیین توالی </strong><strong></strong><strong>گردید. نتایج با نرم‌افزار 5/1 </strong><strong>Chormaspro </strong><strong>تجزیه و تحلیل شدند. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> از مجموع نمونه‌های بیماران، 3 نمونه از قبل برای جهش </strong><strong>Q793X </strong><strong>شناسایی شده بودند که در این بیماران وجود موتاسیون در حالت هموزیگوت تایید شد. بر اساس آزمایش‌های انجام شده، دو نمونه از میان بیماران تعیین جهش نشده به کمک دو روش </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>و </strong><strong>ARMS-PCR </strong><strong>، واجد جهش </strong><strong>Q793X </strong><strong>شناخته شدند. در میان 30 نمونه نرمال نیز، هیچ حالت هتروزیگوتی برای این موتاسیون مشاهده نشد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> جهش </strong><strong>Q793X </strong><strong>در میان جمعیت ایرانی از فراوانی بالایی برخوردار است. هر دو روش </strong><strong>ARMS PCR </strong><strong>و </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>در بررسی این جهش تک نوکلئوتیدی مناسب به نظر می‌رسند اگرچه نسبت به هم دارای معایب و مزایایی هستند. </strong></p><p> <strong><i> </i></strong></p> <p> <strong> Abstrac </strong><strong>t </strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Von Willebrand Disease (vWD) type 3 is an inherited disease characterized by severe clinical manifestations due to haemostatic abnormalities. Because of the autosomal recessive pattern of its inheritance, the disease is more frequent in regions with the high rate of consanguine marriages. We have previously demonstrated that despite various mutations of the gene, the Q793X mutation in exon 18 is more frequent in Iranian vWD patients. We have developed two assays to further investigate this mutation among Iranian patients.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> The Q793X mutation status was studied in 15 vWD type 3 patients and 30 normal individuals by ARMS-PCR and real-time PCR assays. Melting curve analysis was performed after each real-time PCR experiment. To confirm the results of assays, all amplified gene fragments were sequenced.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Three out of 15 patients were previously diagnosed as having Q793X mutation in homozygote status. This was further confirmed by the ARMS-PCR and real-time PCR assays. Interestingly, the mutation was also found in 2 other unrelated patients with unknown mutations. Heterozygote status for the mutation was not detected in normal controls.</p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> Q793X mutation in vWF gene is common in Iranian population. However, a particular demographic distribution of the mutation was not observed in this study. Both assays successfully detected the mutation, although each assay has its own advantages and drawbacks. It is up to each laboratory to choose either assay based on their facilities and expertise.</p><p> <strong><i> </i></strong></p> کلمات کلیدی : بیماری فون ویلبراند, Real-Time PCR , جهش Key words: von Willebrand Diseases, Real-Time PCR, Mutation 104 113 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-251-3&slc_lang=fa&sid=1 S. Alavi سارا علوی 910031947532846009547 910031947532846009547 No Sh. Shahbazi شیرین شهبازی sh.shahbazi@modares.ac.ir 910031947532846009548 910031947532846009548 Yes استادیار دانشکده پزشکی دانشگاه تربیت مدرس R. Mahdian رضا مهدیان 910031947532846009549 910031947532846009549 No A.R. Kamyab احمدرضا کامیاب 910031947532846009550 910031947532846009550 No M.A. Shokrgozar محمدعلی شکرگزار 910031947532846009551 910031947532846009551 No