fa بررسی اثرات سیتوتوکسیک پروتئین هیبرید نوترکیب StxA1-GM-CSFبر رده‌های مختلف سلول‌های سرطانی دارای گیرنده GM-CSF عمومى General پژوهشي Research <p> <strong> چکیده </strong></p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> برنامه‌‌های جدیدی برای درمان سرطان مدنظر محققین بوده و یکی از این رویکردها، تحویل هدف دار مواد سمی به سلول‌های سرطانی می‌باشد. در ایمونوتوکسین‌ها از قسمت سیتوتوکسیک توکسین ( دومین کاتالیتیک) باکتری یا گیاه و حذف قسمت اتصال دهنده و جایگزینی آن با یک لیگاند اختصاصی برای یک گیرنده سلولی استفاده می‌شود. در مطالعه قبلی یک ایمونوتوکسین جدید، شیگاتوکسین ـ </strong><strong>CSF </strong><strong>ـ </strong><strong>GM </strong><strong>، طراحی و در سیستم باکتریایی از طریق مهندسی ژنتیک بیان شد. در تحقیق حاضر فعالیت سیتوتوکسیک شیگاتوکسین ـ </strong><strong>CSF </strong><strong>ـ </strong><strong>GM </strong><strong>بررده‌های مختلف سلول‌های سرطانی که گیرنده فاکتور محرک کلونی گرانولوسیت ـ ماکروفاژ ( </strong><strong>CSF </strong><strong>ـ </strong><strong>GM </strong><strong>) را بیان می‌کنند مورد مطالعه قرار گرفت. به علاوه اثر آنتی‌بادی ضد گیرنده </strong><strong>GM-CSF </strong><strong>در مهار فعالیت سیتوتوکسیک شیگاتوکسین ـ </strong><strong></strong><strong>CSF </strong><strong>ـ </strong><strong>GM </strong><strong>بر رده‌های مختلف سلول‌های سرطانی دارای گیرنده مذکور ارزیابی‌شد. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. رده‌های مختلف سلول‌های سرطانی خونی و جامد که گیرنده فاکتور محرک کلونی گرانولوسیت‌ ـ ‌ماکروفاژ </strong><strong>(GM-CSF) </strong><strong>را بیان می‌کردند، در محیط کشت </strong><strong>RPMI </strong><strong>کشت داده شدند.سیتـوتوکسیسیتی با استفاده از روش‌های رنگ سنجی تریپان‌بلو و </strong><strong>MTT </strong><strong>ارزیابی شد. اثر دراز مدت سیتوتوکسیسیتی با استفاده از سنجش کلونوژنیک بـرای رده‌هـای‌ سلـول‌هـای‌ ســرطانی ‌جامد انجـام شـد.گیرنده </strong><strong>GM-CSF </strong><strong>با استفاده از‌ آنتی‌بادی‌ آنتی </strong><strong>CSF </strong><strong>ـ </strong><strong>GM </strong><strong>مهار شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> در بین رده‌های سلولی تومورهای خون ساز، </strong><strong>K562 </strong><strong></strong><strong>و در بین رده‌های سلولی تومورهای جامد، </strong><strong>LS174T </strong><strong>بیشترین سیتوتوکسیسیتی را در غلظت </strong><strong>ng/ml </strong><strong>40 و در24 ساعت نشان دادند. </strong></p><p> <strong> PC-3 </strong><strong>، </strong><strong>MCF-7 </strong><strong>و </strong><strong>DU145 </strong><strong>بیشترین توکسیسیتی را در زمان 72 ساعت و در غلظت </strong><strong>ng/ml </strong><strong>160 نشان دادند. خنثی‌سازی </strong><strong>StxAl-GM-CSF(Neutralization) </strong><strong>با آنتی بادی </strong><strong>GM-CSF </strong><strong>منجر به از بین رفتن اثر توکسیسیتی شد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> پروتئین نوترکیب هیبرید جدید، شیگاتوکسین ـ </strong><strong>CSF </strong><strong>ـ </strong><strong>GM </strong><strong>، فعالیت بیولوژیک خود را حفظ نموده و بر رده‌های مختلف سلول‌های سرطانی که گیرنده فاکتور محرک کلونی گرانولوسیت ـ ماکروفاژ </strong><strong>(GM-CSF) </strong><strong>را بیان می‌کردند به طور اختصاصی اثر سیتوتوکسیسیتی را اعمال می‌کند و می‌تواند به عنوان یک رویکرد جدید برای درمان سرطان در نظر گرفته شود. </strong></p><p> <strong><i> کلمات کلیدی: </i></strong><strong>شیگاتوکسین، محرک کلونی گرانولوسیت، ماکروفاژ، سیتوتوکسیسیتی، سلول‌های سرطانی </strong></p> <p> <strong> Abstract </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i> Background and Objectives </i></strong></p><p>  Immunotoxins are comprised of cell targeting and cell killing moieties. Immunotoxins have been proposed as new strategy for cancer treatment. In this study, catalytic domain of Shiga-toxin (A1) was fused to human Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor (h GM-CSF) . The fused gene was already expressed in E.coli and the expressed protein was analysed for its cytotoxic activity on human cancer cell lines expressing GM-CSF receptor (GM-CSFR). Moreover, the impact of GM-CSF receptor on inhibition of cytotoxic effect of Shiga-toxin-GM-CSF recombinant hybrid in cell lines expressing GM-CSF receptor (GM-CSFR) was evaluated. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p>  Cell lines were grown in RPMI-1640 medium supplemented with 10-20% heat inactivated fetal bovine serum (Gibco-BRL). Cytotoxic activity was checked on the cell lines and was measured by trypan blue staininig and MTT assay. GM-CSF receptor was blocked by anti-GM-CSF antibody. </p><p>  </p><p> <strong><i> Results </i></strong></p><p>  Cytotoxicity studies revealed that the chimeric protein induced cytotoxic effect on different cell lines. This effect was found to be specific due to the presence of killing moiety (A1) that exerts its effect through specific cell targeting domain i.e. GM-CSF, by binding to its receptor present on those cell lines. K562 and LS174T were the most sensitive <strong>. </strong></p><p>  </p><p> <strong><i> Conclusions </i></strong></p><p>  Our results revealed that the hybrid protein is toxic to the cancer cell lines bearing GM-CSF receptor this effect could be a potential factor for further consideration of hybrid protein as a therapeutic agent. </p><p>  </p><p> <strong><i> Key words: </i></strong>Shiga-toxin , Granulocyte macrophage - colony stimulating factor ( GM–CSF ) , Cytotoxicity, Cancer cells </p> ,شیگاتوکسین,محرک کلونی گرانولوسیت,ماکروفاژ,سیتوتوکسیسیتی,سلول‌های سرطانی Shiga-toxin , Granulocyte macrophage - colony stimulating factor ( GM–CSF ) , Cytotoxicity, Cancer cells 1 8 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-60&slc_lang=fa&sid=1 M Habibi Roudkenar مهریار حبیبی رودکنار mhr376@ yahoo.com 9100319475328460010750 9100319475328460010750 Yes M Oloomi دکتر مانا علومی 9100319475328460010751 9100319475328460010751 No M.A Shokrgozar دکتر محمدعلی شکرگذار 9100319475328460010752 9100319475328460010752 No N Shahrokhi دکتر نادر شاهرخی 9100319475328460010753 9100319475328460010753 No A Mohammadi Roushandeh آمنه محمدی روشنده 9100319475328460010754 9100319475328460010754 No Y Kuwahara دکتر یوشیکازو کوواهارا 9100319475328460010755 9100319475328460010755 No M Fukumoto دکتر مانابو فوکوموتو 9100319475328460010756 9100319475328460010756 No