fa افزایش بیان گیرنده آنتی‌ژن کایمریک بر سطح لنفوسیت‌های T به کمک الحاق ژنومی بيوتكنولوژي Biotechnology پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> فعال‌سازی اختصاصی سیستم ایمنی به ویژه لنفوسیت‌های </strong><strong>T </strong><strong>، یکی از اهداف اساسی در حوزه ایمونوتراپی سرطان است </strong><strong>. </strong><strong>به منظور القای سلول‌های ایمنی فرد بیمار، از گیرنده‌های کایمریکی که حاوی خاصیت اتصال ویژه به آنتی‌ژن‌ها هستند، استفاده شده است تا لنفوسیت‌های </strong><strong>T </strong><strong>سیتوتوکسیک را فعال کنند. گیرنده کایمریک، متشکل است از قسمت متصل شونده به آنتی‌ژن از آنتی‌بادی که از طریق یک مولکول اتصال‌دهنده خارج سلولی به ناحیه داخل غشایی و نیز دومین‌های سیتوپلاسمی شروع کننده سیگنالینگ لنفوسیتی متصل می‌باشد. هدف از این بیان پایدار و افزایش یافته </strong><strong>CAR </strong><strong>( </strong><strong>Chimeric Antigen Receptor </strong><strong>) بر سطح سلول‌های </strong><strong>T </strong><strong>، فعال شدن مؤثر سیستم ایمنی بر علیه سلول‌های توموری بود. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در یک مطالعه تجربی، نواحی متغیر آنتی‌بادی‌های زنجیره سنگین شتری( </strong><strong>VHH </strong><strong>یا نانوبادی) به جای قسمت هدف گیرنده آنتی ژن در ساختار گیرنده کایمریک استفاده شد. برای بیان پایدار و افزایش یافته گیرنده کایمریک حاوی </strong><strong>VHH </strong><strong>، از سیستم اینتگراز </strong><strong>PhiC31 </strong><strong>به منظور الحاق ژن گیرنده کایمریک در داخل ژنوم سلول‌های </strong><strong>T </strong><strong>استفاده شد. سازه‌های بیان‌کننده گیرنده‌های کایمریک و اینتگراز </strong><strong>PhiC31 </strong><strong>به داخل رده سلولی </strong><strong>Jurkat </strong><strong>، کوترانسفکت گردیدند و بیان گیرنده‌های کایمریک در روزهای اول و سی‌ام بعد از ترانسفکشن، با روش </strong><strong>semi-quantitative RT-PCR </strong><strong>اندازه‌گیری شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> نتایج تحقیق در روز سی‌ام نشان داد که کوترانسفکشن سازه‌های بیانی اینتگراز فاژ </strong><strong>PhiC31 </strong><strong>و سازه‌های حاوی </strong><strong>CAR </strong><strong>، منجر به بیان پایدار و افزایش یافته این گیرنده‌ها می‌شود. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> بر اساس نتایج تحقیق، آنزیم اینتگراز </strong><strong>PhiC31 </strong><strong>، قابلیت استفاده در ایمونوتراپی به واسطه سلول‌های </strong><strong>T </strong><strong>حاوی گیرنده کایمریک را دارد. </strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> The specific activation of the immune system especially T lymphocytes has been a long-term goal of cancer immunotherapy. In an approach to induce the patient’s own immune cells, chimeric antigen receptors (CAR) were used to activate cytotoxic T lymphocytes. The CAR consists of an antigen binding domain of antibody molecule linked through an extracellular linker to transmembrane and cytoplasmic domains of lymphocyte-triggering moieties. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In our research group, variable domains of heavy chain antibodies (VHH or nanobody) derived from camelids were used instead of the antigen-binding domain in chimeric receptors constructs. To obtain a stable and increased expression of VHH harboring CAR, the PhiC31 integrase system was used for CAR gene integration into the T-cell genome. Constructs expressing CAR and PhiC31 integrase were co-transfected into the Jurkat cell line and CAR expression was quantified after one day and 30 days after transfection by a semi-quantitative RT-PCR method. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Our results on day 30 confirmed that co-transfection of PhiC31 integrase constructs and CAR expressing constructs resulted in stable and high expression of the receptors. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> Based on our results, we conclude that PhiC31 integrase enzyme can be used for immunotherapy of cancer mediated by T cells expressing chimeric recetors.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p>   </p> کلمات کلیدی : اینتگراز, کانسر, ایمونوتراپی Key words : Integrase, Cancer, Immunotherapy 8 18 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-375-2&slc_lang=fa&sid=1 F. Jafari Iri Sofla فرنوش جعفری ایری سفلی 910031947532846009516 910031947532846009516 No F. Rahbarizadeh فاطمه رهبری‌زاده Rahbarif@modares.ac.ir 910031947532846009517 910031947532846009517 Yes دانشیار گروه بیوتکنولوژی دانشگاه تربیت مدرس M.J. Rasaee محمد جواد رسایی 910031947532846009518 910031947532846009518 No H. Aghaii Bakhtiari سید حمید آقایی بختیاری 910031947532846009519 910031947532846009519 No S. Khaleghi سپیده خالقی 910031947532846009520 910031947532846009520 No