fa دست‌ورزی سلول‌های بنیادی مزانشیمی با استفاده از سیستم بیانی آدنو ویروس حاوی ژن حفاظت‌کننده سلولی NRF2 سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> مهم‌ترین مساله در پیوند سلول‌های بنیادی مزانشیمی( </strong><strong>MSC </strong><strong>)، بقای پایین پس از پیوند می‌باشد. دست‌ورزی ژنتیکی آن‌ها، یک استراتژی در جهت حفاظت سلولی علیه آسیب‌های محیطی است. حفظ خاصیت تمایزی این سلول‌ها پس از دست‌کاری، مهم می‌باشد. در این مطالعه توانایی تمایز سلول‌های بنیادی مزانشیمی پس از دست‌ورزی با </strong><strong>NRF2 </strong><strong>بررسی شد. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در یک مطالعه تجربی، سلول‌های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان جداسازی شد. ژن </strong><strong>NRF2 </strong><strong>با روش </strong><strong>TOPOcloning </strong><strong>به وکتور </strong><strong>pENTR </strong><strong>وارد شد. با استفاده از تکنولوژی </strong><strong>gateway </strong><strong>، ژن </strong><strong>NRF2 </strong><strong>، به وکتور </strong><strong>pAd/CMV/V5-DEST </strong><strong>انتقال یافت. آدنوویروس نوترکیب در سلول‌های </strong><strong>AD293 </strong><strong>تولید، سلول‌های بنیادی مزانشیمی به آن‌ها آلوده و بیان </strong><strong>NRF2 </strong><strong>توسط </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>تایید شد. پس از مواجهه سلول‌های بنیادی مزانشیمی دست‌ورزی شده با </strong><strong>NRF2 </strong><strong>با شرایط استرسی، میزان بقا و آپوپتوز سلولی آن‌ها ارزیابی و تمایز سلول‌های بنیادی مزانشیمی بیان کننده </strong><strong>NRF2 </strong><strong>به رده استخوان و چربی بررسی شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> ژن </strong><strong>NRF2 </strong><strong>به طور موفقیت‌آمیزی در سلول‌های بنیادی مزانشیمی بیان شد. تمایز </strong><strong>NRF2-MSC </strong><strong>ها به رده‌های استخوانی و چربی، نشان می‌دهد افزایش بیان </strong><strong>NRF2 </strong><strong>، خصوصیت تمایزی سلول‌های بنیادی مزانشیمی را تغییر نمی‌دهد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> بیان </strong><strong>NRF2 </strong><strong>، فاکتور به خوبی شناخته شده حفاظت سلولی، با استفاده از سیستم بیانی آدنو ویروس، با ظرفیت تمایزی آن‌ها تداخل نمی‌کند. </strong><strong>NRF2-MSC </strong><strong>ها ممکن است در آینده جهت استفاده در سلول درمانی بر اساس سلول بنیادی قابل استفاده باشند. </strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Poor viability of Mesenchymal Stem Cells (MSCs) following transplantation is one of the major challenges in their therapeutic application. Manipulation of MSCs by the genetic engineering method is one of the strategies used to protect the cells against cytotoxic microenvironment. However, maintaining multi differentiation capacity of MSCs following manipulation is important. We investigated if the manipulation of MSCs with NRF2 affects the multi differentiation capacity. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> MSCs were isolated from bone marrow. NRF2 was isolated and TOPO cloned into the pENTR vector. The recombinant vector was transferred into pAD/CMV/V5-DEST vector by gateway technology. Recombinant adenovirus was produced in AD293 cells, followed by being infected into MSCs. Expression of NRF2 was verified by RT-PCR. The NRF2 engineered MSCs were exposed to stress conditions followed by the evaluation of the cells viability and apoptosis. Finally, NRF2 expressing MSCs differentiation into osteoblast and adipocyte lineages was studied.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> NRF2 was successfully expressed in MSCs. NRF2- MSCs differentiation into osteoblast and adipocyte lineages indicating overexpression of NRF2 does not affect the differentiation property of MSCs. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions </i></strong></p><p> Expression of NRF2, a well known cytoprotective factor, by using adenovirus expression system does not intervene in the differentiation capacity of MSCs. NRF2-MSCs might be applicable for stem cell-based cell therapy in future.</p><p> <strong> </strong></p><p>   </p> سلول بنیادی مزانشیمی, پروتئین Nrf2 , TOPO Mesenchymal Stem Cells, Nrf2 Protein, TOPO 272 285 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-246&slc_lang=fa&sid=1 M. Mohammadzadeh محمد محمدزاده 910031947532846009770 910031947532846009770 No R. Halabian راحله حلبیان 910031947532846009771 910031947532846009771 No M. Mohammadipoor مهشید محمدی‌پور 910031947532846009772 910031947532846009772 No A.A. Kiani علی‌اصغر کیانی 910031947532846009773 910031947532846009773 No A. Gharehbaghian احمد قره‌باغیان 910031947532846009774 910031947532846009774 No N. Amirizadeh ناصر امیری‌زاده 910031947532846009775 910031947532846009775 No M. Habibi Roudkenar مهریار حبیبی رودکنار roudkenar@ibto.ir 910031947532846009776 910031947532846009776 Yes دانشیار مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران، مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون