fa توسعه روش NASBA-ELISA برای تشخیص HIV-1 RNA بيوتكنولوژي Biotechnology پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> با شروع عفونت </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>، اولین مارکری که در خون آشکار می‌شود، </strong><strong>RNA </strong><strong>ویروسی می‌باشد. از میان روش‌های موجود که شناسایی </strong><strong>RNA </strong><strong>را هدف قرار می‌دهند؛ متداول‌ترین روش‌ها </strong><strong>NASBA </strong><strong>و </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>هستند. </strong><strong>NASBA </strong><strong>مزیت‌های متعددی نسبت به </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>ارایه می‌کند. در این پژوهش، واکنش </strong><strong>NASBA </strong><strong>در ترکیب با روش آشکارسازی آسان و حساس الایزا، برای تشخیص و آشکارسازی </strong><strong>HIV-1 RNA </strong><strong>مورد استفاده قرار گرفت. </strong></p><p> <strong><i> مواد و روش‌ها </i></strong></p><p> <strong> نوع مطالعه انجام شده از نوع بنیادی ـ کاربردی بود. با وارد کردن نوکلئوتید </strong><strong>11-dig-UTP </strong><strong>در مخلوط واکنش </strong><strong>NASBA </strong><strong>، </strong><strong>RNA </strong><strong>نشاندار تولید شد. آن‌گاه محصولات نشاندار </strong><strong>NASBA </strong><strong>در فاز مایع به یک پروب اختصاصی متصل به بیوتین هیبرید شدند. سپس هیبریدهای حاصل به یک پلیت پوشیده شده با استرپتواویدین منتقل شده، پس از اعمال شستشوها و خارج کردن محصولات غیر اختصاصی از محیط واکنش، آشکارسازی نهایی با اضافه کردن کونژوگه آنتی دیگوکسی ژنین ـ آنزیم و سوبسترای آن صورت گرفت. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> نتایج به دست آمده نشانگر کارآیی واکنش </strong><strong>NASBA </strong><strong>در تکثیر ناحیه مورد نظر از ژنوم ویروس بود و آشکارسازی محصولات </strong><strong>NASBA </strong><strong>بر روی ژل آگاروز منحصراً یک باند 176 نوکلئوتیدی مربوط به هدف را نشان می‌داد. با به کارگیری روش الایزا در آشکارسازی محصولات </strong><strong>NASBA </strong><strong>، برای غلظت 01/0 مایکرو مولار پروب، </strong><strong>OD </strong><strong>برابر با 11/0 </strong><strong>± </strong><strong>049/1 به دست آمد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> در این مطالعه با به کارگیری آغازگر و پروب مناسب، روش تشخیصی </strong><strong>NASBA-ELISA </strong><strong>با حساسیت و اختصاصیت بالا برای </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>راه‌اندازی شد. </strong><strong></strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Viral RNA is the first blood marker which appears in HIV-1 infection. RT-PCR and NASBA are the commonly used techniques for amplification of RNA. NASBA technique provides more advantages over RT-PCR. In this study, an NASBA assay combined with an easy, sensitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of HIV-1 RNA.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> 11-dig-UTP was added to an NASBA reaction mixture and the RNA amplicons were labeled. Then, the dig-labeled NASBA products hybridized to a biotinylated specific probe in hybridization solution buffer and the hybrids were transferred to a streptoavidin-coated plate. After several washing processes and emission of nonspecific products, the final detection of the captured RNA was done by addition of anti-dig antibody-enzyme conjugate and the substrate.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> The results demonstrated that, NASBA is an efficient method for amplification of the target genome. Detection of NASBA products by agarose gel electrophoresis showed a unique 176 bp band corresponding to the specific target. For the detection of NASBA products, an ELISA assay was performed using 0.01 µM probe, the OD of 1.049 ± 0.11 was obtained.</p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> In this study, by using suitable primers and probe a highly sensitive and specific NASBA-ELISA method for detection of HIV-1 developed.</p><p>  </p> NASBA , الایزا, ایمونواسی, HIV-1 Nasba, Elisa, Immunoassay, HIV-1 42 51 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-250-2&slc_lang=fa&sid=1 M. Shahrabi مریم شهرابی 910031947532846009901 910031947532846009901 No M. Forouzandeh مهدی فروزنده foroz@modares.ac.ir 910031947532846009902 910031947532846009902 Yes دانشیار دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس F. Sabahi فرزانه صباحی 910031947532846009903 910031947532846009903 No M. Paryan مهدی پریان 910031947532846009904 910031947532846009904 No