Journal of Iranian Blood Transfusion

fa کاربرد و ارزشیابی PCR در تشخیص مالاریا در اهداکنندگان خون استان سیستان و بلوچستان Application and evaluation of PCR in detection of malaria in donors of transfusion centers in Sistan-Baloochestan province in 2002 عمومى General پژوهشي Research چکید ه سابقه و هدف مالاریا پس از هپاتیت ویروسی و ایدز یکی از عوارض شایع ناشی از انتقال خون درمناطق مالاریاخیز است. پیشگیری از مالاریای ناشی از انتقال خون بستگی به غربالگری اهداکنندگان خون وحذف نمونه‌های آلوده دارد. به‌منظور غربالگری نمونه‌های خون از روش‌های انگل‌شناسی، سرولوژی ومولکولی استفاده شده است. مواد و روش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تحلیلی بود. در این مطالعه از120 اهداکننده خون شهرستان ایرانشهر دراستان سیستان وبلوچستان خون‌گیری به‌عمل آمد. نمونه‌ها از نظر آزمایش گسترش‌های نازک و ضخیم خون محیطی، آزمایش ایمونوفلوئورسانس غیرمستقیم و تکنیک PCR مورد بررسی قرار گرفتند. یافته‌ها <table cellspacing="0" cellpadding="0" width="100%"><tbody><tr><td> 1 320 </td></tr></tbody></table><table cellspacing="0" cellpadding="0" width="100%"><tbody><tr><td> 1 20 </td></tr></tbody></table>نتایج آزمایش میکروسکوپی گسترش نازک و ضخیم خون محیطی از نظر وجود انگل مالاریا در تمام موارد منفی بود. آزمایش IFA با استفاده از آنتی‌ژن پلاسمودیوم ویواکس در 38 نفر و با آنتی‌ژن پلاسمودیوم فالسیپاروم در 6 نفر از اهداکنندگان، عیار ± تا آنتی‌بادی را نشان داد (17 نفر از گروه اول و 4 نفر از گروه دوم، سابقه ابتلا به مالاریا در گذشته داشتند). آزمایش PCR با استفاده از روش سیلیکا در تخلیص DNA و آغازگرهای اختصاصی پلاسمودیوم‌های ویواکس و فالسیپاروم و میزان حساسیت 2 تا3 انگل در هر میکرولیتر خون برای همه افراد مورد مطالعه نتیجه منفی داشت . نتیجه گیری طبق گزارش‌های موجود، آزمایش میکروسکوپی گسترش‌های خون، علی‌رغم سادگی و ارزان بودن، پرزحمت و وقت‌گیر است و برای شناسایی و یافتن مقادیر کم انگل در اهداکنندگان بی‌علامت خون و غربالگری گروه بزرگی ازاین افراد، روشی غیرحساس می‌باشد ، آزمایش IFA نیز حضور واقعی عفونت را همیشه نشان نمی‌دهد . ثابت شده است که روش‌های مولکولی و از جمله PCR حساس‌تر و اختصاصی‌تر از آزمایش‌های قراردادی میکروسکوپی بوده و مزیت بزرگ آن‌ها قابلیت شناسایی عفونت در بیماران با میزان پایین انگل می‌باشد. در این بررسی شاید به‌علت کم بودن تعداد افراد تحت مطالعه و یا محدود بودن طول دوره بررسی با روش PCR ، مورد مثبتی مشاهده نشده و یا احتمال دارد، میزان انگل در افراد بررسی شده از2 تا3 انگل درهر میکرولیتر خون کم‌تربوده باشد. کلمات کلیدی: مالاریا، انتقال خون، PCR ، IFA ، اهداکنندگان چکیدهسابقه و هدف مالاریا پس از هپاتیت ویروسی و ایدز یکی از عوارض شایع ناشی از انتقال خون درمناطق مالاریاخیز است. پیشگیری از مالاریای ناشی از انتقال خون بستگی به غربالگری اهداکنندگان خون وحذف نمونه‌های آلوده دارد. به‌منظور غربالگری نمونه‌های خون از روش‌های انگل‌شناسی، سرولوژی ومولکولی استفاده شده است. مواد و روش‌هامطالعه انجام شده از نوع تحلیلی بود. در این مطالعه از120 اهداکننده خون شهرستان ایرانشهر دراستان سیستان وبلوچستان خون‌گیری به‌عمل آمد. نمونه‌ها از نظر آزمایش گسترش‌های نازک و ضخیم خون محیطی، آزمایش ایمونوفلوئورسانس غیرمستقیم و تکنیک PCR مورد بررسی قرار گرفتند.یافته‌ها <group id="_x0000_s1029" style="MARGIN-TOP: 24.55pt Z-INDEX: -1 LEFT: 0px MARGIN-LEFT: 214.5pt WIDTH: 35.1pt POSITION: absolute HEIGHT: 27pt TEXT-ALIGN: left" coordsize="702,540" coordorigin="10266,9392"><shapetype id="_x0000_t202" coordsize="21600,21600" path="m,l,21600r21600,l21600,xe" o:spt="202"><stroke joinstyle="miter" ></shapetype><shape id="_x0000_s1030" style="LEFT: 10266px WIDTH: 702px POSITION: absolute TOP: 9392px HEIGHT: 540px" stroked="f" type="#_x0000_t202"><textbox style="mso-next-textbox: #_x0000_s1030"><table cellspacing="0" cellpadding="0" width="100%"><tbody><tr><td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8 BORDER-TOP: #ece9d8 BORDER-LEFT: #ece9d8 BORDER-BOTTOM: #ece9d8 BACKGROUND-COLOR: transparent"><div> 1320</div></td></tr></tbody></table></textbox></shape><line id="_x0000_s1031" style="POSITION: absolute" to="10734,9602" from="10416,9602"></line></group><group id="_x0000_s1026" style="MARGIN-TOP: 24.55pt Z-INDEX: -2 LEFT: 0px MARGIN-LEFT: 247.95pt WIDTH: 35.1pt POSITION: absolute HEIGHT: 27pt TEXT-ALIGN: left" coordsize="702,540" coordorigin="10026,8702"><shape id="_x0000_s1027" style="LEFT: 10026px WIDTH: 702px POSITION: absolute TOP: 8702px HEIGHT: 540px" stroked="f" type="#_x0000_t202"><textbox style="mso-next-textbox: #_x0000_s1027"><table cellspacing="0" cellpadding="0" width="100%"><tbody><tr><td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8 BORDER-TOP: #ece9d8 BORDER-LEFT: #ece9d8 BORDER-BOTTOM: #ece9d8 BACKGROUND-COLOR: transparent"><div>120</div></td></tr></tbody></table></textbox></shape><line id="_x0000_s1028" style="POSITION: absolute" to="10494,8912" from="10260,8912"></line></group>نتایج آزمایش میکروسکوپی گسترش نازک و ضخیم خون محیطی از نظر وجود انگل مالاریا در تمام موارد منفی بود. آزمایش IFA با استفاده از آنتی‌ژن پلاسمودیوم ویواکس در 38 نفر و با آنتی‌ژن پلاسمودیوم فالسیپاروم در 6 نفر از اهداکنندگان، عیار ± تا آنتی‌بادی را نشان داد (17 نفر از گروه اول و 4 نفر از گروه دوم، سابقه ابتلا به مالاریا در گذشته داشتند). آزمایش PCR با استفاده از روش سیلیکا در تخلیص DNA و آغازگرهای اختصاصی پلاسمودیوم‌های ویواکس و فالسیپاروم و میزان حساسیت 2 تا3 انگل در هر میکرولیتر خون برای همه افراد مورد مطالعه نتیجه منفی داشت.نتیجه گیری طبق گزارش‌های موجود، آزمایش میکروسکوپی گسترش‌های خون، علی‌رغم سادگی و ارزان بودن، پرزحمت و وقت‌گیر است و برای شناسایی و یافتن مقادیر کم انگل در اهداکنندگان بی‌علامت خون و غربالگری گروه بزرگی ازاین افراد، روشی غیرحساس می‌باشد، آزمایش IFA نیز حضور واقعی عفونت را همیشه نشان نمی‌دهد. ثابت شده است که روش‌های مولکولی و از جمله PCR حساس‌تر و اختصاصی‌تر از آزمایش‌های قراردادی میکروسکوپی بوده و مزیت بزرگ آن‌ها قابلیت شناسایی عفونت در بیماران با میزان پایین انگل می‌باشد. در این بررسی شاید به‌علت کم بودن تعداد افراد تحت مطالعه و یا محدود بودن طول دوره بررسی با روش PCR، مورد مثبتی مشاهده نشده و یا احتمال دارد، میزان انگل در افراد بررسی شده از2 تا3 انگل درهر میکرولیتر خون کم‌تربوده باشد.کلمات کلیدی: مالاریا، انتقال خون، PCR، IFA، اهداکنندگان Abstract Background and ObjectivesAfter hepatitis and AIDS, malaria is the most prevalent transfusion outcome in endemic areas. Presence of asymptomatic carriers of malaria parasites in the endemic areas can be a source of infection in transmission of malaria by blood transfusion. Prevention of malaria caused by blood transfusion depends on screening blood donors and deleting infected blood samples. To screen blood samples, parasitological, serologic and molecular methods have been applied. Materials and MethodsIn this study 120 blood donors in Iranshahr in Sistan-Baloochestan province were tested with different methods of thick and thin blood films, Immuno-Fluorescent Antibody Test (IFAT), and Polymerase Chain Reaction (PCR). ResultsThe result of all thick and thin blood films were negative. IFAT by using P.vivax antigen and P.falciparum antigen for 38 and 6 donors respectively showed a titre of antibody equal to ± 1/20-1/320 (17 of the former group and 4 of the latter had a history of malaria infection). The PCR assay using silica for DNA extraction and using P.falciparum specified primers with sensitivity rate equal to 2-3 parasites per microlitre of blood was negative for all subjects under study. ConclusionsThis study showed, although microscopic examination of blood smears was inexpensive and simple, but it is labor-intensive and time-consuming that makes it insensitive for detection of low-level parasitemia in asymptomatic donors and for screening a large number of specimen. IFAT would not always show the real existence of parasites and in spite of simplicity and sensitivity because of its disability to be automated is not suitable for screening a large number of specimen. On the other hand, IFAT in individuals with malaria history and absence of parasites in their blood may be positive for a long period. It was approved that molecular methods such as PCR were more sensitive and more specific than conventional microscopic examination and their great advantage was the ability to detect the infection with low-level parasitemia that may have been distinguished by blood films examination. In the present study, probably because of low number of specimen or limited study duration with PCR method, or probably since parasitemia exiting in the subjects under study was less than 2-3 parasites per microlitre of blood, we were not able to detect positive cases. Key words: Malaria, Blood transfusion, PCR, IFA, Blood donors ,مالاریا,انتقال خون ,PCR,IFA,اهداکنندگان Malaria, Blood transfusion, PCR, IFA, Blood donors 105 114 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-31&slc_lang=fa&sid=1 M. Moghtadaei مینا مقتدایی mina_moghtadaei@yahoo.com 9100319475328460011134 9100319475328460011134 Yes G.H. Edrissian دکتر غلامحسین ادریسیان 9100319475328460011135 9100319475328460011135 No S. Amini Kafiabad دکتر صدیقه امینی کافی‌آباد 9100319475328460011136 9100319475328460011136 No Sh. Samiei شهرام سمیعی 9100319475328460011137 9100319475328460011137 No H. Keshavarz دکتر حسین کشاورز 9100319475328460011138 9100319475328460011138 No M. Nateghpoor دکتر مهدی ناطق‌پور 9100319475328460011139 9100319475328460011139 No