Journal of Iranian Blood Transfusion

fa بهینه‌سازی خلوص فاکتور IX انعقادی با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی هپارین و مقایسه آن با کروماتوگرافی تعویض یونی Improving purification of coagulation F IX using heparin affinity chromatography and its comparison with ion exchange chromatography عمومى General پژوهشي Research چکیدهسابقه و هدف بیماری هموفیلی B‌، به‌علت کاهش یا عدم وجود فاکتور IX انعقادی می‌باشد. روش درمان انتخابی برای این بیمـاران، استفـاده از فاکتـور IX است که تا حـد امکـان خالص شـده باشد، لذا محققین درصـدد تفکیک و خالص‌سازی پروتئین‌های پلاسمایی برآمده‌اند. از روش‌های رایج جهت تخلیص فاکتور IX می‌توان استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی را نام برد. ولی از دو دهه قبل به‌تدریج کروماتوگرافی تمایلی نیز به‌کار گرفته شده است.هدف از این تحقیق در مرحله اول یافتن میزان خالص‌سازی فاکتور IX با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی هپارین (به‌عنوان روش تکمیلی) و سپس مقایسه آن با سیستم کروماتوگرافی تعویض یونی با استفاده از DEAE بوده است. مواد و روش‌هامطالعـه انجـام شده از نـوع تجربـی بود. به‌منظـور تهیه فاکتـورIX انعقـادی از ستون XK-16 و ژل‌هــای DEAE- سفاروز و هپارین- سفاروز استفاده گردید. برای اندازه‌گیری فعالیت انعقادی، کیت پلاسمایی فاقد فاکتور IX و برای اندازه‌گیری میزان آنتی‌ژن، کیت الیزا مورد استفاده قرارگرفت.یافته‌ها فعالیت ویژه فاکتور IX و در نهایت میزان خالص‌سازی آن نسبت به پلاسما در کلیه مراحل کار مشخص گردید که با اضافه شدن یک مرحله کروماتوگرافی تمایلی (هپارین- سفاروز) به روش تهیه فاکتور IX، میزان فعالیت ویژه فاکتور IX از IU/mg 1/3 به IU/mg 29 افزایش یافت و میزان خلوص آن در مقایسه با پلاسما حدود1450 برابر شد. درحالی‌که در استفاده تنها از کروماتوگرافی تعویض یونی (DEAE- سفاروز)، خلوص فاکتور IX حدود 155 برابر پلاسما می‌باشد.نتیجه گیری نتایج این بررسی نشان می‌دهد که اضافه نمودن یک مرحله کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از هپارین، در افزایش درجه خلوص و فعالیت ویژه این پروتئین پلاسمایی نقش چشمگیری داشته است.<span lang="FA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 9pt FONT-FAMILY: Titr mso-bidi-language: FA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ascii-font-family: 'Times New Roman' mso-hansi-font-family: 'Times New Roman' mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US">کلمات<span lang="AR-SA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 9pt FONT-FAMILY: Titr mso-bidi-language: AR-SA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ascii-font-family: 'Times New Roman' mso-hansi-font-family: 'Times New Roman' mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US"> کلیدی:<span lang="AR-SA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 9pt FONT-FAMILY: Lotus mso-bidi-language: AR-SA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ascii-font-family: 'Times New Roman' mso-hansi-font-family: 'Times New Roman' mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US"> <span lang="AR-SA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 9pt FONT-FAMILY: "Times New Roman" mso-bidi-language: FA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US"> <span lang="AR-SA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 11pt FONT-FAMILY: Lotus mso-bidi-language: AR-SA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ansi-font-size: 9.0pt mso-ascii-font-family: 'Times New Roman' mso-hansi-font-family: 'Times New Roman' mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US">کروماتوگرافی تمایلی هپارین، فاکتور <span style="FONT-SIZE: 9pt FONT-FAMILY: "Times New Roman" mso-bidi-font-size: 11.0pt mso-bidi-language: AR-SA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-bidi-font-family: Lotus mso-no-proof: yes mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US">IX<span lang="FA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 11pt FONT-FAMILY: Lotus mso-bidi-language: FA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ansi-font-size: 9.0pt mso-ascii-font-family: 'Times New Roman' mso-hansi-font-family: 'Times New Roman' mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US"> انعقادی، هموفیلی <span style="FONT-SIZE: 9pt FONT-FAMILY: "Times New Roman" mso-bidi-font-size: 11.0pt mso-bidi-language: FA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-bidi-font-family: Lotus mso-no-proof: yes mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US">B<span lang="FA" dir="rtl" style="FONT-SIZE: 11pt FONT-FAMILY: Lotus mso-bidi-language: FA mso-fareast-font-family: 'Times New Roman' mso-no-proof: yes mso-ansi-font-size: 9.0pt mso-ascii-font-family: 'Times New Roman' mso-hansi-font-family: 'Times New Roman' mso-ansi-language: EN-US mso-fareast-language: EN-US">، کروماتوگرافی تعویض یونی Abstract Background and ObjectivesHemophilia B is a genetic disorder due to deficiency or complete absence of factor IX coagulation factor. Treatment of choice for these patients is use of factor IX concentrates. Therefore, purification of plasma proteins and seperation of factor IX have been major objectives for scientists involved in this field. In this respect, purification procedure using ion exchange chromatography is widely used, but in the past decade affinity chromatography was also introduced. The objective of the present study has been to apply both techniques for the purification of factor IX and compare the quality and yield of the product. Materials and MethodsFor the purification procedure, chromatography columns (XK-16), containing DEAE sepharose and Heparin sepharose were used. Factor IX coagulation activity was measured using a one-stage coagulation assay and factor IX antigen was quantified using ELISA technique. ResultsThe specific activity and relative increase in purity of factor IX was calculated and it was demonstrated that specific activity improved from 3.1 IU/mg using DEAE ion exchange to 29 IU/mg when affinity chromatography was added and purity was increased from 155 to 1450 respectively. ConclusionsThe present study demonstrates that addition of an affinity chromatography step using heparin sepharose is a major improvement in the purification of factor IX, where both specific activity and purity are increased considerably. Key words: Heparin affinity chromatography, Factor IX, Hemophilia B, Ion exchange chromatography ,کروماتوگرافی تمایلی هپارین, فاکتورIX انعقادی,هموفیلی B,کروماتوگرافی تعویض یونی Heparin affinity chromatography, Factor IX, Hemophilia B, Ion exchange 91 98 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-29&slc_lang=fa&sid=1 S.Sh. Musavi Motlagh سید شهاب‌الدین موسوی مطلق Shahabi088@yahoo.com 9100319475328460011125 9100319475328460011125 Yes H. Rezvan دکتر حوری رضوان 9100319475328460011126 9100319475328460011126 No A.A. Pourfathollah دکتر علی‌اکبر پورفتح‌اله 9100319475328460011127 9100319475328460011127 No M.K. Mousavi Hosseini دکتر میرکامران موسوی حسینی 9100319475328460011128 9100319475328460011128 No