fa تأثیر کیفی هم کشتی سلول‌های کیسه زرده با رده سلولی M2-10B4 در حضور و غیاب اریتروپویتین بر تمایز آن‌ها به رده اریتروئیدی عمومى General پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p>  <strong><i>سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> سلول‌های بنیادی خون‌ساز کیسه زرده به علت تکثیر زیاد و نداشتن آنتی‌ژن‌های وابسته به MHC برای مطالعات هماتوپویتیک مناسب‌تر هستند. با توجه به اثرات مثبت استفاده از سیستم هم کشتی در تمایز سلول‌‌های بنیادی، در این تحقیق سعی شد از رده سلول M2-10B4 به همراه اریتروپویتین برای تمایز سلول‌های بنیادی کیسه زرده استفاده شود. </strong></p><p> <strong> </strong><strong><i>مواد وروش‌‌ها </i></strong></p><p> <strong> کیسه زرده از موش‌‌های حامله 10 روزه جدا گردید و با استفاده از سرنگ و سرسوزن‌‌های مختلف ( </strong><strong>G </strong><strong>19، </strong><strong>G </strong><strong>23 و </strong><strong>G </strong><strong>27) و آنزیم کلاژناز 1/0% و یا تریپسین 2 </strong><strong>5 </strong><strong>/0% دارای </strong><strong>EDTA </strong><strong>02/0% به سلول‌‌های </strong><strong>منفرد </strong><strong>تبدیل شدند. سپس از سلول‌های رده </strong><strong>M2-10B4 </strong><strong>که فعالیت میتوزی آن‌ها با میتومایسین متوقف شده </strong><strong>بود </strong><strong>برای هم کشتی استفاده شد و </strong><strong>به </strong><strong>محیط کشت </strong><strong>حاوی </strong><strong>ng/ml </strong><strong>5 </strong><strong>0 فاکتور سلول بنیادی </strong><strong>و </strong><strong></strong><strong>U/ml </strong><strong></strong><strong>1 </strong><strong>اریتروپویتین </strong><strong>اضافه و در37 درجه سانتی‌گراد و فشار </strong><strong>5 </strong><strong>درصد </strong><strong>CO₂ </strong><strong>نگهداری شد </strong><strong>. </strong><strong>بعد از گذشت یک هفته رشد و تمایز سلول‌‌ها </strong><strong>، </strong><strong>بررسی و سنجش کلنی در محیط نیمه جامد </strong><strong></strong><strong>و رنگ </strong><strong>آ </strong><strong>میزی بنزیدین صورت گرفت. </strong><strong></strong></p><p>  <strong><i>یافته‌‌ها</i></strong> </p><p>  <strong>سلول‌‌ها برروی این رده سلولی به‌خوبی رشد و تکثیر ‌یافتند. البته درمحیط حاوی اریتروپویتین، رشد بهتری نسبت به محیط فاقدآن صورت گرفته بود وسلول‌‌های بنزیدین مثبت یا رده اریتروئیدی یبیشتری مشاهده‌ شد. </strong></p><p>  <strong><i>نتیجه گیری </i></strong></p><p>  <strong>می‌توان با انتخاب لایه پشتیبان مثل سلول‌‌های استرومایی مغزاستخوان و به‌کار بردن هورمون اریتروپویتین، درصد بیشتری رده اریتروئیدی به دست آورد، گرچه برای تعیین نوع خون سازی اولیه یا ثانویه نیازبه انجام تحقیقات تکمیلی است. </strong></p><strong><i>کلمات کلیدی: </i>سلول‌‌های کیسه زرده ، اریتروپویتین ، تمایز‌، سلول‌‌های اریتروئیدی </strong> <p> <strong> Abstract </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> The embryonic yolk sac cells have two unique characteristics: high proliferative capacity and lack of MHC associated antigen. According to the positive effects of co-culturing system on the differentiation of stem cells, in this study we evaluate the effect of M2-10B4 stromal cell line and erythropoietin (EPO) on the differentiation of embryonic yolk sac cells to erythroid cells. </p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i> Materials and Methods</i></strong><strong> </strong></p><p> The yolk sacs were dissected from 10-day mice and their cells were separated using syring needles and enzyme digestions (0.1% collagenase/20 fetal calf serum (FBS) or 0.25% trypsin – 0.02% EDTA at 37 ° C). The M2-10B4 stromal cells were cultured in the DMEM medium and mitotically inactivated using mitomycin C. These cells were co-cultured with yolk stem cells in the medium containing stem cell factor (50 ng/ml) EPO (1U/ml) and the colony assay of these cells (5 ´ 10⁴ cells/ml) have been done in the presence of interleukin-3 (40 ng/ml), stem cell factor (50 ng/ml) and EPO (1U/ml) in semisolid medium. After 7 days, benzidine staining on the colonies was carried out and positive benzidine colonies were considered as erythroid colonies. </p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> The colony assay showed that in the presence of EPO the growth of erythroid colonies were better than the other group and they had more benzidine colonies and cells.<strong></strong></p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> By using the stromal feeder layer such as bone marrow stromal cells and erythropoietin the differentiation and proliferation of YSC was improved however, further studies are needed.</p><p> <strong> </strong></p><p> <strong> </strong></p><strong><i>Key words </i></strong><i>: </i>Yolk sac cells, Erythropoietin, Differentiation, Erythroid cells ,سلول‌های کیسه زرد,اریتروپویتین,تمایز,سلول‌های ارتیروئیدی Yolk sac cells, Erythropoietin, Differentiation, Erythroid cells 73 81 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-27&slc_lang=fa&sid=1 M. Salehnia دکتر مژده صالح نیا mogdeh@dr.com 9100319475328460011119 9100319475328460011119 Yes T. Rahbarpour طیبه رهبرپور 9100319475328460011120 9100319475328460011120 No M. Soleimani دکتر مسعود سلیمانی 9100319475328460011121 9100319475328460011121 No