fa شناسایی دقیق حذف‌های ناشناخته خوشه ژنی بتاگلوبین در ناقلین بتا تالاسمی با استفاده از دو روش Real-time PCR و MLPA هماتولوژي Hematology پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> بتا تالاسمی به طور عمده از جهش‌های نقطه‌ای یا حذف‌های کوچک ناشی می‌شود ولی مواردی از وجود حذف‌های بزرگ در خوشه ژنی بتاگلوبین مشاهده شده است. شناسایی حذف‌های شناخته شده مبتنی بر روش </strong><strong>Gap PCR </strong><strong>می‌باشد در حالی که حذف‌های ناشناخته با این روش شناسایی نمی‌شوند. برای فایق آمدن بر این محدودیت، دو روش کمی </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>و </strong><strong>MLPA </strong><strong>برای بررسی کمی خوشه ژنی بتاگلوبین به کار گرفته شد. </strong></p><p> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p> <strong> در این مطالعه که به صورت مورد - شاهدی انجام شد، به روش سرشماری 40 فرد ناقل مشکوک به حذف در خوشه ژنی بتاگلوبین که دارای شاخص‌های خونی کاهش یافته( </strong><strong>pg </strong><strong>27 </strong><strong>MCH < </strong><strong>، </strong><strong>fl </strong><strong>80 </strong><strong>< </strong><strong></strong><strong>MCV </strong><strong>)، هموگلوبین </strong><strong>A₂ </strong><strong>نرمال و هموگلوبین </strong><strong>F </strong><strong>افزایش یافته یا نرمال بودند وارد مطالعه شدند. تعداد نسخه‌های ژنی با به کارگیری روش </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>و روش مقایسه‌ای چرخه آستانه، مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین تعداد نسخه‌های ژنی با روش </strong><strong>MLPA </strong><strong>نیز ارزیابی شد. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> نتایج حاصل از </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>برای ژن‌های </strong><strong>HBB </strong><strong>، </strong><strong>HBD </strong><strong>و </strong><strong>HBG2 </strong><strong>با استفاده از روش بررسی مقایسه‌ای چرخه آستانه، میزان </strong><strong>^–</strong><strong>^ΔΔ</strong><strong>^Ct</strong><strong>2 را برای افراد سالم، 18/0 </strong><strong>± </strong><strong>96/0 و برای ناقلین حذف در خوشه ژنی بتاگلوبین، 04/0 </strong><strong>± </strong><strong>58/0 نشان داد. هم چنین نتایج حاصل از </strong><strong>MLPA </strong><strong>، کاهش حدود 50% در ارتفاع پیک شناساگرهای تکثیر یافته مرتبط با ژن حذف شده در افراد هتروزیگوت را نشان داد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> نتایج </strong><strong>MLPA </strong><strong>و بررسی پیک‌های حاصل از تکثیر شناساگر، وجود حذف را در مناطقی که توسط </strong><strong>Real-time PCR </strong><strong>شناسایی شده بود، تایید کرد. با کمک این دو روش می‌توان حذف‌های شناخته شده و ناشناخته را در ناقلین بتا تالاسمی با دقت زیاد شناسایی نمود. </strong></p><p> <strong><i> کلمات کلیدی </i>: بتا تالاسمی، بتاگلوبین، حذف ژنی </strong></p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Although beta thalassemia is mainly caused by mutations involving single base substitutions and small deletions, there have been reports showing deletions of large regions of beta- globin genes play a similar causing role. The strategy to identify beta thalassemia carriers with known deletions is based on PCR techniques such as Gap PCR. There are however some unknown deletions that can not be detected by the above methods. To overcome this limitation, Real-time PCR and MLPA were developed as two quantitative assays for analysis of beta-globin gene cluster. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> The subjects were evaluated in a case-control study. Among individuals referred to genetic laboratories of Pasteur Institute of Iran and Kawsar Genetic Research Center, 40 were suspected of having a large deletion in β-globin gene cluster. The including criteria were hematological findings such as low blood indices (MCV <80 fl and MCH <27 pg), normal HbA2 and raised or normal HbF. Genomic DNA was extracted from peripheral blood. A Real-time PCR assay was developed using comparative threshold cycle (Ct) method for analysis of gene copy number. In addition, gene dosage was analyzed using MLPA method. </p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Real-time PCR results for quantitative analysis of Beta, Delta, G-gamma genes showed the ratio (2^-ΔΔCt) of 0.96 ± 0.18 for normal individuals and 0.58 ± 0.04 for carriers of deletions in beta globin gene cluster. MLPA results showed nearly 50% reduction in the height of the peaks corresponding to regions of deletions. </p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> MLPA results confirmed the presence of the same deletions detected by Real-time PCR in all of the carrier individuals. It would be ideal to combine these quantitative assays to confirm corresponding results for accurate diagnosis of known and unknown deletions in beta thalassemia carriers. </p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i>Key words</i></strong><strong><i> : </i></strong>beta-Thalassemia, beta-Globins, Gene Deletion</p><p>  </p> بتا تالاسمی, بتاگلوبین, حذف ژنی beta-Thalassemia, beta-Globins, Gene Deletion 225 235 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-34-3&slc_lang=fa&sid=1 S. Babashah صادق باباشاه 9100319475328460010339 9100319475328460010339 No S. Jamali سمیه جمالی 9100319475328460010340 9100319475328460010340 No R. Mahdian رضا مهدیان 9100319475328460010341 9100319475328460010341 No M. Hayat Nosaeid مینا حیات نوسعید 9100319475328460010342 9100319475328460010342 No M. Karimipoor مرتضی کریمی‌پور 9100319475328460010343 9100319475328460010343 No F. Maryami فرشته مریمی 9100319475328460010344 9100319475328460010344 No M. Raeisi مرضیه رئیسی 9100319475328460010345 9100319475328460010345 No R. Alimohammadi راحله علی محمدی 9100319475328460010346 9100319475328460010346 No S. Zeinali سیروس زینلی siruszeinali@yahoo.com 9100319475328460010347 9100319475328460010347 Yes