fa تشخیص مولکولی لنفومای غیر هوچکین از نوع سلول B با استفاده از بررسی بازآرایی هماتولوژي Hematology پژوهشي Research تشخیص مولکولی لنفومای غیر هوچکین از نوع سلول B با استفاده از بررسی بازآرایی ژنی زنجیره سنگین ایمونوگلوبولین ابوالفضل یوسفیان1، دکتر بهزاد پوپک2، دکتر حسن ابوالقاسمی3، دکتر آزیتا آذرکیوان4، دکتر محمد فرهادی لنگرودی5، دکتر علیرضا صادقی‌پور6، دکتر مژگان جیحونیان6، دکتر سید محمد جوادپور خیاط6، دکتر خندان زارع7، کبری فراهانی8،‌ میترا صلاحمند9 چکیده سابقه و هدف بازآرایی قطعات ژنی V ، D و J زنجیره سنگین ایمونوگلوبولین همراه با اضافه و حذف شدن نوکلئوتیدها بین قطعات بازآرایی شده، موجب شکل‌گیری مناطق فوق متغیر منحصر به فرد می‌گردد. از این مناطق می‌توان برای بررسی کلونالیتی سلول B به منظور تشخیص مولکولی لنفومای غیر هوچکین و نیز تشخیص قطعی موارد مشکوک استفاده کرد. هدف از مطالعه حاضر استفاده از بازآرایی زنجیره سنگین ایمونوگلوبولین در تشخیص مولکولی و افتراقی لنفومای غیرهوچکین از موارد واکنشی بود. مواد وروش‌ها مطالعه انجام شده از نوع گذشته‌نگر بود. برای انجام مطالعه حاضر، بلوک‌های پارافینه 42 بیمار با تشخیص پاتولوژیک لنفوم غیر هوچکین سلول B (22 بیمار)، هایپرپلازی واکنشی و فولیکولار(10 بیمار)، لنفوم بدخیم بدون ایمونوهیستوشیمی(10 بیمار) از بخش پاتولوژی بیمارستان‌های آیت‌ا... طالقانی، حضرت بقیه‌ا... و حضرت علی‌اصغر جمع‌آوری شدند. پس از استخراج DNA و انجام مراحل کنترل کیفی، PCR با استفاده از آغازگرهای مشترک برای تکثیر مناطق CDR-III انجام شد. محصولات PCR پس از آنالیز هترودوبلکس روی ژل پلی‌آکریل آمید الکتروفورز شده، با استفاده از رنگ‌آمیزی نقره مشاهده و بررسی گردید. یافته‌ها 77% از(95% :CI) گروه اول بیماران(تشخیص قطعی لنفوم غیر هوچکین سلول B) و 70% (95%CI:) از گروه سوم(با تشخیص لنفوم بدخیم بدون ایمونوهیستوشیمی) بازآرایی کلونال را نشان دادند. در گروه دوم(هایپرپلازی واکنشی و فولیکولار) موردی از بازآرایی کلونال دیده نشد. نتیجه گیری با اندکی تفاوت، یافته‌های مطالعه حاضر با مطالعات متعددی که تاکنون در کشورهای مختلف انجام شده قابل مقایسه است و نشان می‌دهد که بررسی کلونالیتی سلول B با استفاده از IgHPCR روشی مفید و کمک کننده برای دست‌یابی به تشخیص دقیق‌تر یا قطعی لنفوم غیر هوچکین از نوع سلول B در بیماران ایرانی مبتلا می‌باشد. کلمات کلیدی: بازآرایی ژنی، لنفوم غیر هوچکین، ایمونوگلوبولین تاریخ دریافت : ‌10/5 /86 تاریخ پذیرش : 17/7 /87 1ـ دانشجوی کارشناسی ارشد هماتولوژی ـ مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران 2ـ مؤلف مسؤول: PhD هماتولوژی ـ استادیار دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران ـ صندوق پستی: 1495/19295 3ـ فوق تخصص هماتولوژی و انکولوژی کودکان ـ استاد مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی بقیه‌ا... 4- فوق تخصص هماتولوژی و انکولوژی کودکان ـ استادیار مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران 5ـ متخصص آسیب‌شناسی ـ استادیار مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران 6ـ متخصص آسیب‌شناسی ـ استاد دانشگاه علوم پزشکی ایران 7- متخصص آسیب‌شناسی ـ استاد دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی 8ـ کارشناس علوم آزمایشگاهی ـ دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران 9ـ کارشناس علوم آزمایشگاهی ـ آزمایشگاه پیوند Molecular diagnosis of B cell Non-Hodgkin Lymphoma by evaluation of immunoglobulin heavy chain gene rearrangement Yousefian A.1(MS ), Poopak B.2(PhD), Abolghasemi H.1,3(MD), Azarkeivan A.1(MD), Farhadi Langroudi M.1(MD), Sadeghipour A.4(MD), Jeyhonian M.4(MD),Pourkhayat M.J.4(MD), Zare K.5(MD), Farahani K.2(BS), Salahmand M.6(BS) 1Iranian Blood Transfusion Organization-Research Center-Iran 2Islamic Azad University-Medical Branch. Tehran- Iran 3Baghiyatalah University of Medical Sciences-Molecular Biology Research Center, Tehran-Iran 4IranUniversity of Medical Sciences, Iran 5Shahid Beheshti University of Medical Sciences,Iran 6Payvand Medical Laboratory, Iran Abstract Background and Objectives Rearrangement of V, D, and J segments of immunoglobulin heavy chain gene with inserted or deleted nucleotides within rearranged segments makes unique hypervariable regions (CDR-3). These regions can be used for evaluation of B cell clonality for the purpose of molecular diagnosis of Non-Hodgkin Lymphoma (NHL) and for confirmatory diagnosis in suspicious cases. Materials and Methods In this study, samples of 42 patients were collected from Taleghani, Baqhiyatalah, and Aliasghar hospitals out of this number, there were 22 patients with diagnosis of B cell NHL, 10 with reactive hyperplasia, and 10 with malignant lymphoma. After DNA extraction from formalin fixed paraffin embedded tissues, PCR was done using consensus primers for amplification of CDR-3 region. PCR products were analyzed after heteroduplex analysis using polyacrylamide gel electrophoresis and silver stain. Results Clonal patterns in group 1 (B cell NHL), 2 (reactive and follicular hyperplasia), and 3 (morphological diagnosis without immunohistochemistry) were observed in 77.2%, 0%, and 70% of patients, respectively. Conclusions Our findings are compatible with other international studies with minor differences. The diagnosis of B-cell lymphoid malignancy can frequently be substantiated by detecting clonal immunoglobulin heavy chain (IGH ) gene rearrangement. Key words: Gene rearrangement, Non-Hodgkin Lymphoma, Immunoglobulin SJIBTO 2008 5(3): 157-166 Received: 31 Aug 2007 Accepted: 8 Oct 2008 Correspondence: Poopak B., PhD of Hematology. Islamic Azad University- Tehran Medical Branch. P.O.Box: 19295-1495 , Tehran, Iran, Tel: (+9821) 22006660 Fax : (+9821) 22264145 E-mail: bpoopak@yahoo.com بازآرایی ژنی, لنفوم غیر هوچکین, ایمونوگلوبولین Gene rearrangement, Non-Hodgkin Lymphoma, Immunoglobulin 157 166 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-183&slc_lang=fa&sid=1 Abolfazl Yosefian ابوالفضل یوسفیان 9100319475328460010392 9100319475328460010392 No Behzad poopak بهزاد پوپک 9100319475328460010393 9100319475328460010393 Yes Hassan Abolghasemi حسن ابوالقاسمی 9100319475328460010394 9100319475328460010394 No Azita Azarkeivan آزیتا آذرکیوان 9100319475328460010395 9100319475328460010395 No Mohammad Farhadilangerodi محمد فرهادی لنگرودی 9100319475328460010396 9100319475328460010396 No Alireza Sadeghipour علیرضا صادقی پور 9100319475328460010397 9100319475328460010397 No Mojgan Jeyhonian مژگان جیحونیان 9100319475328460010398 9100319475328460010398 No Mohammad Javadpourkhayat محمد جوادپورخیاط 9100319475328460010399 9100319475328460010399 No Khandan Zare خندان زارع 9100319475328460010400 9100319475328460010400 No Kobra Farahani کبری فراهانی 9100319475328460010401 9100319475328460010401 No Mitra Salahmand میترا صلاحمند 9100319475328460010402 9100319475328460010402 No