fa بیان ژن‌های خود بازسازی Oct-4 ، Sox-2 ، Nanog ،‌Nucleostemin ، Bmi-1 و Sox-9 در سلول‌های بنیادین مزانشیمی ورید بند ناف انسان سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> سلول‌های بنیادین با دو ویژگی کلیدی توانایی خودبازسازی و پر توان بودن آن‌ها تعریف می‌شوند. از آن جا که مکانیسم‌های کنترل کننده خودبازسازی در سلول‌های بنیادین مختلف می‌تواند متفاوت باشد، بررسی بیان ژن‌های مسؤول خودبازسازی در سلول‌های مختلف دارای اهمیت بسیار زیادی است. سلول‌های بنیادین بند ناف به تازگی مورد توجه زیادی قرار گرفته‌اند، چرا که این سلول‌ها دارای مزایای زیادی نسبت به سایر سلو‌ل‌های بنیادین، برای استفاده در روش‌های سلول درمانی هستند. هدف از انجام مطالعه حاضر، بررسی بیان ژن‌های خودبازسازی </strong><strong>Oct-4 </strong><strong>، </strong><strong>Sox2 </strong><strong>، </strong><strong>Nanog </strong><strong>، </strong><strong>Bmi-1 </strong><strong>، </strong><strong>Sox-9 </strong><strong>و </strong><strong>Nucleostemin </strong><strong>در سلول‌های بنیادین مزانشیمی جدا شده از ورید بند ناف انسان می‌باشد. </strong></p><p> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. بند ناف‌ها در شرایط استریل جداسازی و در بافر </strong><strong>HBSS </strong><strong>به آزمایشگاه انتقال یافتند. سلول‌های بنیادین مزانشیمی به وسیله تیمار با آنزیم کلاژناز استخراج و بر اساس توانایی چسبیدن به ظروف پلاستیکی و در محیط </strong><strong>DMEM </strong><strong>حاوی 15% </strong><strong>FBS </strong><strong>کشت داده شدند. سپس مارکرهای سطحی </strong><strong>CD105 </strong><strong>، </strong><strong>CD45 </strong><strong>، </strong><strong>HLA-DR </strong><strong>، </strong><strong>CD166 </strong><strong>،‌ </strong><strong>CD54 </strong><strong>و </strong><strong>CD34 </strong><strong>در این سلول‌ها بررسی شد و نهایتاًَ بیان ژن‌های مسؤول خودبازسازی با استفاده از روش‌های </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>و ایمونوسیتوشیمی مورد مطالعه قرار گرفت. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> بررسی فلوسایتومتری مارکرهای سطحی سلول‌های جداسازی شده نشان داد که این سلول‌ها برای مارکر </strong><strong>CD105 </strong><strong>( </strong><strong>SH2 </strong><strong>)(98%) مثبت و برای مارکرهای </strong><strong>CD34 </strong><strong>(0%)، </strong><strong>CD54 </strong><strong>(1%)، </strong><strong>CD45 </strong><strong>(0%)، </strong><strong>CD106 </strong><strong>(0%)، </strong><strong>CD166 </strong><strong>(1%) و </strong><strong>HLA-DR </strong><strong>(0%) منفی هستند. هم چنین بررسی‌های انجام شده، برای اولین بار بیان ژن‌های </strong><strong>Oct-4 </strong><strong>،‌ </strong><strong>Nanog </strong><strong>، </strong><strong>Nucleostemin </strong><strong>،‌ </strong><strong>Bmi-1 </strong><strong>و </strong><strong>Sox-9 </strong><strong>و عدم بیان ژن </strong><strong>Sox-2 </strong><strong>را در سلول‌های بنیادین مزانشیمی ورید بند ناف انسان نشان داد. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> نتایج حاصله نشان می‌دهد مکانیسم‌هایی که هم اکنون برای عملکرد ژن‌های </strong><strong>Oct-4 </strong><strong>، </strong><strong>Sox-2 </strong><strong>و </strong><strong>Nanog </strong><strong>شناخته شده است، تنها مکانیسم ممکن برای تنظیم خودبازسازی از طریق این ژن‌ها نیست، بلکه ترکیبی از ژن‌های دخیل در تنظیم خودبازسازی سلول‌های بنیادین جنینی و بالغ نیز می‌تواند برای تنظیم خودبازسازی سلول‌های بنیادین مورد استفاده قرار بگیرد. </strong></p><p> <strong><i> کلمات کلیدی </i></strong><strong>: </strong><strong></strong><strong>سلول‌های بنیادین مزانشیمی، بند ناف، ایمونوسیتوشیمی، </strong><strong>PCR </strong><strong></strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Stem cells are defined with two main characteristics which are self renewal potential and pluripotency. It is of great importance to study expression of self renewal genes in different stem cells, because self renewal regulatory mechanisms may vary among different kinds of stem cell. Human umbilical cord stem cells have recently gained so much attention, because their use in cell therapy methods has several advantages. The main objective of the present study was to evaluate the expression of Oct-4, Sox-2, Nanog, Nucleostemin, Bmi-1 and Sox-9 self renewal genes in human umbilical cord vein mesenchymal stem cells.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In this experimental study, umbilical cords were obtained in sterile condition and carried to the laboratory in HBSS buffer. Mesenchymal stem cells were harvested by collagenase treatment and cultured by means of their adhesiveness to plastic surfaces in DMEM medium supplemented with 15% FBS. To confirm the mesenchymal identity of these cells, expression of some surface markers including CD105, CD106, CD54, CD45, HLA-DR, CD166, and CD34 was analysed by means of flowcytometery. Finally, expression of self renewal genes was evaluated by RT-PCR and immunocytochemistry techniques.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong><i /></p><p> Flowcytometry analysis of UBMCs revealed that the cells are positive for CD105 (98%) and negative for CD34 (0%), CD54 (1%), CD45 (0%), CD106 (0%), CD166 (0%), and HLA-DR (0%). Our results also revealed Oct-4, Nanog, Nucleostemin, Bmi-1 and Sox-9 expression in human umbilical cord vein mesenchymal stem cells, but not Sox-2 self renewal gene expression.</p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> The results showed that the mechanism which is known today for Oct-4, Nanog and Sox-2 function is not the only possible mechanism in which these three genes can play role to regulate self renewal potential of stem cells. Obtained results can offer that a combination of regulatory mechanisms which regulate self renewal of adult and embryonic stem cells, may be responsible to regulate self renewal of stem cells. </p><p> <strong>�</strong></p><p> <strong><i>Key words</i></strong><strong><i> : </i></strong><strong></strong>Mesenchymal stem cells, Umbilical cord, PCR, Immunocytochemistry</p> سلول‌های بنیادین مزانشیمی, بند ناف, ایمونوسیتوشیمی, PCR Mesenchymal stem cells, Umbilical cord, PCR, Immunocytochemistry 275 284 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-153&slc_lang=fa&sid=1 A. Jafari Kermani عباس جعفری کرمانی 9100319475328460010589 9100319475328460010589 No F. Fathi فردین فتحی farfath@yahoo.com 9100319475328460010590 9100319475328460010590 Yes S.J. Mowla سید جواد مولی 9100319475328460010591 9100319475328460010591 No Y. Gheisari یوسف قیصری 9100319475328460010592 9100319475328460010592 No