fa فراوانی آنتی‌ژن‌های پلاکتی در اهداکنندگان خون: مقایسه روش مولکولی با روش الیزا( برای HPA-1a) طب انتقال خون Blood transfusion medicine پژوهشي Research <strong><p align="justify">  چکید ه </p><p align="justify"> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p align="justify"> <strong> روش‌های سرولوژیکی جهت تعیین نوع آنتی‌ژن‌های پلاکتی به دلیل محدودیت دسترسی به منابع آنتی‌سرم‌های اختصاصی و تعداد ناکافی پلاکت در بیماران مبتلا به ترمبوسیتوپنی محدود شده است. بنابراین از روش‌های مولکولی و بر پایه </strong><strong>DNA </strong><strong>جهت تعیین ژنوتیپ‌ آنتی‌ژن‌های پلاکتی استفاده می‌شود. از آن جا که در مورد میزان شیوع این آنتی‌ژن‌ها در جمعیت ایران اطلاعات چندانی در دسترس نیست لذا هدف مطالعه، تعیین شیوع این آنتی‌ژن‌ها در تعدادی از اهداکنندگان خون می‌باشد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> مطالعه انجام شده از نوع توصیفی بود. </strong><strong>DNA </strong><strong>از 3 میلی‌لیتر خون کامل که از 100 نفر اهداکننده خون، در لوله‌های حاوی </strong><strong>EDTA </strong><strong>جمع‌آوری شده بود، استخراج گردید. فراوانی آلل‌های آنتی‌ژن‌های پلاکتی </strong><strong>HPA-1,2,3,4,5 </strong><strong>و </strong><strong>HPA-15 </strong><strong>با استفاده از روش </strong><strong>PCR-SSP </strong><strong>مورد مطالعه قرار گرفتند. 40 نمونه از این 100 نفر نیز برای بررسی فنوتیپ به روش الیزا بررسی شدند. جهت بررسی فراوانی ژنی از معادله </strong><strong>Hardy weinberg </strong><strong>و تحلیل نتایج از آزمون‌های </strong><strong>Z </strong><strong>و </strong><strong>X² </strong><strong>استفاده شد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> فراوانی ژنی آنتی‌ژن‌های پلاکتی مورد بررسی به شرح زیر می‌باشند: </strong></p><p align="justify"> <strong> HPA-1a </strong><strong>(98/0)، </strong><strong>HPA-1b </strong><strong>(02/0)، </strong><strong>HPA-2a </strong><strong>(54/0)،‌ </strong><strong>HPA-2b </strong><strong>(46/0)،‌ </strong><strong>HPA-3a </strong><strong>(48/0)، </strong><strong>HPA-3b </strong><strong>(52/0)، </strong><strong>HPA-4a </strong><strong>(0/1) ،‌ </strong><strong>HPA-5a </strong><strong>(99/0)، </strong><strong>HPA-5b </strong><strong>(01/0)، </strong><strong>HPA-15a </strong><strong>(47/0)، </strong><strong>HPA-15b </strong><strong>(53/0). هیچ موردی از </strong><strong>HPA-4b </strong><strong>در این مطالعه دیده نشد. فراوانی فنوتیپی زیر حاصل گردید: </strong></p><p align="justify"> <strong> 19% </strong><strong>HPA3a/3a </strong><strong>، 92% </strong><strong>HPA2a/2b </strong><strong>،‌ 8% </strong><strong>HPA2a/2a </strong><strong>،‌ 4% </strong><strong>HPA1a/1b </strong><strong>،‌ 96% </strong><strong>HPA1a/1a </strong><strong>، 2% </strong><strong>HPA5b/5b </strong><strong>،‌ 98% </strong><strong>HPA5a/5a </strong><strong>، 100% </strong><strong>HPA4a/4a </strong><strong>،‌22% </strong><strong>HPA3b/3b </strong><strong>، 59% </strong><strong>HPA3a/3b </strong><strong>، 19% </strong><strong>HPA15b/15b </strong><strong>، 67% </strong><strong>HPA15a/15b </strong><strong>، 14% </strong><strong>HPA15a/15a </strong><strong>. 26 نمونه(65%) از 40 نمونه مورد بررسی برای </strong><strong>HPA-1 </strong><strong>به روش الیزا مثبت، 4 نمونه(10%) منفی و 10 مورد </strong><strong>HPA-1a </strong><strong>بینابینی شدند. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p align="justify"> <strong> در این مطالعه ژنوتیپ هموزیگوت </strong><strong>HPA-1b/b </strong><strong>به دست نیامد که مشابه سایر مطالعات انجام شده در آسیا می‌باشد. در این مطالعه با توجه به تفاوت‌های موجود در میزان فراوانی </strong><strong>HPA-1,2,5 </strong><strong>در مقایسه با سفیدپوستان اروپایی، به نظر می‌رسد احتمال تحریک تولید آنتی‌بادی ضد پلاکتی توسط این آنتی‌ژن‌ها نیز متفاوت از نتایج سایر سفیدپوستان باشد که نیازمند بررسی‌های بیشتر در این زمینه است. به نظر می‌رسد </strong><strong>HPA-15b </strong><strong>و </strong><strong>HPA-5b </strong><strong>و </strong><strong>HPA-2b </strong><strong>ممکن است باعث پورپورای پس از تزریق و مقاومت پلاکتی شوند که این دو نقطه نظر نیازمند بررسی‌های بیشتر می‌باشند. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> کلمات کلیدی </i></strong><strong>: </strong><strong></strong><strong>آنتی‌ژن‌های پلاکتی، فراوانی ژنی، </strong><strong>PCR </strong><strong>، ایران </strong><strong></strong></p><p align="justify"> </p></strong> Abstract Background and Objectives Serologic methodes used in HPA–typing are limited due to restricted access to specific anti-sera and decreased platelet count in thrombocytopenic patients. Therefore, several DNA-based HPA-genotyping techniques were used to determine the genotype of HPAs. Since nothing is known about the HPA gene frequency in Iran, this study was performed to determine its frequency in some Iranian blood donors. Materials and Methods DNA was extracted from a 3-ml whole blood sample prepared from donations of 100 Iranian blood donors collected in EDTA-coated blood tubes. Human platelet (PLT) alloantigens (HPA)-1/2/3/4/5 and HPA-15 typing were performed by the Polymerase Chain Reaction – Sequence Specific Primer technique ( PCR-SSP), and HPA-1a phenotyping was performed by ELISA method for 40 % of samples. Results The frequencies of HPA genes were: HPA-1a 98% , HPA-1b 2% , HPA-2a 54% , HPA-2b 46% , HPA-3a 48% , HPA-3b 52% , HPA-4a 100% , HPA-5a 99% , HPA-5b 1% , HPA-15a 47% , and HPA-15b 53%. HPA-4b was not found . The frequencies of HPA phenotypes were determined to be: HPA1a/1a 96% , HPA1a/1b 4% , HPA2a/2a 8% , HPA2a/2b 92% , HPA3a/3a 19% , HPA3a/3b 59% , HPA3b/3b 22%, HPA4a/4a 100% , HPA5a/5a 98% , HPA5b/5b 2% , HPA15a/15a 14% , HPA15a/15b 67% , and HPA15b/15b 19%. 40 HPA-1a phenotyping by ELISA showed 26 positive (OD > 0.5 ), 4 negative (OD < 0.3 ), and 10 indeterminate samples (0.3 < OD < 0.5) . Conclusions No HPA-1b/b homozygous genotype similar to other Asian studies was found. Since HPA-1,-2,-5 frequencies in the population under study differ from the European Caucasian race, it seems that antibody production in our population might be different from other Caucasians. According to HPA frequencies, it seems that HPA-2b, HPA-5b and HPA-15b may induce posttransfusion purpura and platelet refractoriness which need further investigation. Key words: Platelet antigens, Gene frequency, PCR, Iran آنتی‌ژن‌های پلاکتی, فراوانی ژنی, PCR , ایران Platelet antigens, Gene frequency, PCR, Iran 165 174 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-138&slc_lang=fa&sid=1 T. Madani طاهره مدنی 9100319475328460010602 9100319475328460010602 No Sh. Samiee شهرام سمیعی 9100319475328460010603 9100319475328460010603 No Z. Attaei زهرا عطایی 9100319475328460010604 9100319475328460010604 No M. Kavari مهناز کواری 9100319475328460010605 9100319475328460010605 No Gh.R. Babaei غلامرضا بابایی 9100319475328460010606 9100319475328460010606 No M. Mostakhdemin محبوبه مستخدمین 9100319475328460010607 9100319475328460010607 No M. Shaiegan مژگان شایگان shaiegan@ibto.ir 9100319475328460010608 9100319475328460010608 Yes