fa جداسازی سلول‌های بنیادی مزانشیمی CD34+ از مغز استخوان موش سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> جداسازی و تخلیص سلول‌های بنیادی مزانشیمی( </strong><strong>MSCs </strong><strong>) موش از طریق روش چسبیدن به ظرف کشت پلاستیک، به علت رشد ناخواسته سلول‌های خونی و غیر مزانشیمی بسیار مشکل است. در این مطالعه، جمعیت هموژن از سلول‌های بنیادی مزانشیمی </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>با روش انتخاب ایمنی مثبت( </strong><strong>Positive immunoselection </strong><strong>) از مغز استخوان موش جداسازی شده است. </strong></p><p> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پس از نخاعی کردن موش‌های نژاد </strong><strong>C57B1/6 </strong><strong>، سلول‌های مغز استخوان آن‌ها آسپیره و با دانه‌های آهن‌ربایی متصل به آنتی‌بادی ضد </strong><strong>CD34 </strong><strong>انکوبه گردید. بعد از انتخاب ایمنی مثبت، بخشی از سلول‌ها برای بررسی درصد بیان مارکر </strong><strong>CD34 </strong><strong>با دستگاه فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفتند و مابقی کشت گردیدند. 24 ساعت پس از کشت، سلول‌های غیر چسبان که عمدتاًَ سلول‌های بنیادی خون‌ساز بودند، از طریق شستشو حذف شدند و سلول‌های چسبیده به ظرف کشت پلاستیک از نظر وجود مارکرهای سطحی( </strong><strong>CD11b and CD45 </strong><strong>، </strong><strong>CD34 </strong><strong>، </strong><strong>Vcam-1 </strong><strong>، </strong><strong>Sca-1 </strong><strong>، </strong><strong>CD44 </strong><strong>) مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور اثبات ماهیت مزانشیمی، از آزمایش تمایز به استخوان و چربی استفاده شد. </strong><strong></strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> یک هفته پس از کشت اولیه، جمعیت خالصی از سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>شبه ‌فیبروبلاست به دست آمد. در این سلول‌ها مارکرهای </strong><strong>CD34 </strong><strong>، </strong><strong>Sca-1 </strong><strong>، </strong><strong>CD44 </strong><strong>و </strong><strong>Vcam-1 </strong><strong>بیان شد اما </strong><strong>CD11b </strong><strong>و </strong><strong>CD45 </strong><strong>بیان نشد. در این سلول‌ها ژن‌های تمایز به استخوان(استئوکالسین، استئوپنتین و گیرنده هورمون پاراتیروئید) و چربی(لیپوپروتئین لیپاز و آدیپسین) بیان شدند. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> از این مطالعه می‌توان نتیجه گرفت که با استفاده از این روش امکان تخلیص سلول‌های بنیادی مزانشیمی با کارایی بالا از مغز استخوان موش نژاد </strong><strong>C57B1/6 </strong><strong>وجود دارد. سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>مغز استخوان موش </strong><strong>C57/B16 </strong><strong>با توانایی چسبیدن به ظرف کشت پلاستیک و تمایز به دودمان‌های اسکلتی،‌ سلول‌های بنیادی مزانشیمی می‌باشند. </strong></p><p> <strong><i> کلمات کلیدی </i>: سلول‌های بنیادی مزانشیمی، مغز استخوان، آنتی‌ژن CD34 </strong></p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> The isolation and purification of mesenchymal stem cells (MSCs) from mouse via plastic adherent cultures are arduous due to the unwanted growth of hematopoietic cells and non-MSCs. In this study, homogenous populations of CD34⁺ MSCs from mouse bone marrow were purified through positive immunoselection.</p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In this experimental study, C57BL/6 mice were sacrificed. Their bone marrow cells were aspirated and incubated with anti-CD34 conjugated magnetic beads. After immunoselection, a sample of the cells was prepared for flow cytometry in order to examine the expression of CD34 antigen and the remains were cultivated. 24 hours later, non-adherent cells, mostly consisting of CD34⁺ hematopoietic stem cells were removed and the plastic adherent cultivated cells were investigated for surface markers (CD44, Sca-1, Vcam-1, CD34, CD11b and CD45). The plastic adherent cultivated cells were differentiated into the osteoblastic and adipogenic lineages to investigate the mesenchymal nature. Furthermore, the expression of some surface markers were investigated through flow cytometry.</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Purified populations of fibroblast-like CD34⁺ cells were achieved in the first passage (one week after initiative cultivation). The CD34, CD44, Sca-1 and Vcam-1 markers were expressed but CD11b and CD45 were absent. Osteocyte (osteocalsin, osteopontin, parathyroid hormone receptor) and adipocyte (lipo protein lipase and adipsin) differentiating genes were expressed in these cells. </p><p> <i>�</i></p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> This study indicates that this protocol can result in efficient isolation of homogenous populations of MSCs from C57BL/6 mouse bone marrow. We showed that plastic adherent murine bone marrow derived CD34⁺ cells with capability of differentiating into skeletal lineages <i>in vitro</i> are MSCs.</p><p> <strong>�</strong></p><p> <strong><i>Key words:</i></strong> Mesenchymal stem cells, Bone marrow, CD34 antigen</p><p>  </p> سلول‌های بنیادی مزانشیمی, مغز استخوان, آنتی‌ژن CD34 Mesenchymal stem cells, Bone marrow, CD34 antigen 143 151 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-135&slc_lang=fa&sid=1 صمد ندری 9100319475328460010698 9100319475328460010698 No دکتر مسعود سلیمانی soleimani.masoud@gmail.com 9100319475328460010699 9100319475328460010699 Yes