fa به کارگیری یک پپتید سنتتیک دایمری RhD برای ایمن‌سازی در خرگوش و مقایسه آن با آنتی‌ژن کامل به دست آمده از غشای گلبول قرمز انسان ايمونولوژي Imunology پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">چکیده<br> سابقه و هدف&nbsp;<br> پروتئین‌هایRh ، از اهمیت بالایی در انتقال خون برخوردار می‌باشنـد. در میان آنتی‌ژن‌های گروه خونـیRh ، آنتی‌ژن D بسیار ایمونوژن است و تشخیص این آنتی‌ژن به لحاظ بالینی اهمیت دارد. هدف این مطالعه، ایجاد آنتی‌بادی‌های اختصاصی ضد آنتی‌ژن D در حیوان خرگوش با به کارگیری آنتی‌ژن کامل و دایمری از یک پپتید سنتتیک ویژه آنتی‌ژن D بود. در نهایت، بررسی کارآیی آنتی‌بادی‌های حاصل در آگلوتیناسیون گلبول‌های قرمز انسانی مورد مطالعه قرار گرفت.<br> مواد و روش‌ها<br> در این مطالعه تجربی، آنتی‌بادی ضد RhD &nbsp;در حیوانات خرگوش ایجاد شد. خرگوش‌های 1 و 2، آنتی‌ژن کامل RhD را دریافت نمودند که از غشای گلبول‌های قرمز به روش کروماتوگرافی تمایلی خالص گردیده بود. به موازات، خرگوش 3 با یک پپتید اختصاصی که با روش O-PDM &nbsp;دایمر شده بود ایمونیزه شد. مولکول‌های IgG از آنتی‌سرم‌های خرگوشی خالص شدند. ویژگی آنتی‌ژن خالص شده RhD و هم‌چنین آنتی‌سرم‌های ایجاد شده در خرگوش‌ها با روش ELISA ارزیابی شد. به علاوه عملکرد آنتی‌سرم‌ها از طریق آگلوتیناسیون گلبول‌های قرمز انسانی مورد مطالعه قرار گرفت.<br> یافته‌ها<br> ویژگی آنتی‌ژن RhD خالص شده با به کارگیری یک آنتی‌بادی تجاری به وسیله روش ELISA نشان داده شد. تشکیل آنتی‌بادی‌های ضد RhD در سرم حیوانات خرگوش پس از اتمام مراحل تزریق، با به کارگیری روش ELISA تایید گردید. آنتی‌بادی‌های پلی‌کلونال به دست آمده از حیوانات ایمیون، توانایی آگلوتیناسیون گلبول های قرمز O+ را در روش دو مرحله‌ای و حضور یک آنتی‌بادی ثانویه دارا بودند (3=n). در این رابطه، آنتی‌سرم‌های مربوط به تزریق آنتی‌ژن کامل و پپتید دایمر نتایج مشابهی نشان دادند. آنتی‌بادی‌های به دست آمده تنها قادر به آگلوتیناسیون گلبول‌های قرمز ⁺O از طریق روش دو مرحله‌ای بودند. استفاده از پپتید سنتتیک مرتبط با انتهای آمینو آنتی‌ژن RhD، در شکل دایمر آن ویژگی ایمونولوژیک مشابهی را در مقایسه با آنتی‌ژن کامل نشان داد.<br> نتیجه گیری&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;<br> بر اساس یافته‌های این مطالعه، آنتی‌سرم حاصل از تزریق پپتید سنتتیک دایمری، از نظر قدرت ایمنی‌زایی، نتایج مشابهی با آنتی‌ژن کامل RhD در تست آگلوتیناسیون گلبول‌های قرمز واجد RhD نشان داد. بنابراین، به نظر می‌رسد برای ایمن‌سازی مؤثر با یک پپتید، می‌توان از فرم دایمری مناسب آن پپتید به عنوان جایگزینی برای پپتید کونژوگه و پروتئین حامل استفاده کرد.<br> &nbsp;</div> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-size:8.5pt">gen derived from a synthetic peptide specific to the D antigen. Ultimately, the potential of these antibodies to agglutinate human red blood cells was investigated.</span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Materials and Methods</i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-size:8.5pt">In this experimental study, antibodies against RhD were generated in rabbits. Rabbits 1 and 2 were immunized with the complete RhD antigen, which was purified from the membranes of red blood cells by affinity chromatography. Concurrently, Rabbit 3, was immunized with an RhD antigen dipeptide, which was prepared from a selected peptide of RhD using the O-PDM method. IgG molecules were purified from the antisera produced in rabbits. The characteristics of both the purified RhD antigen and the antisera were evaluated using the ELISA method. Additionally, the functional activity of antisera was assessed through the agglutination of human red blood cells.</span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Results</i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-size:8.5pt">The characteristic of the purified RhD antigen was demonstrated by ELISA assay using commercial anti-RhD antibody. Antibody formation in the sera of rabbits was also confirmed using the ELISA method. The isolated IgG polyclonal rabbit antibodies against RhD showed agglutination of O⁺ red blood cells in the presence of a secondary antibody (n=3). Subsequently, the specificity of the produced antisera was similar between rabbits immunized with the purified antigen and &nbsp;those immunized with the dimerized peptide. The antibodies were only able to agglutinate red blood cells through a two-step method. The synthetic peptide related to the amino terminus of RhD antigen, in its dimeric form, exhibited immunogenic characteristic comparable to those of the complete antigen.</span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Conclusions&nbsp; </i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><a name="_Hlk229835049"><span style="font-size:8.5pt">These findings indicate that the appropriate dimeric form of a peptide can serve as a substitute for the conjugated peptide and a carrier protein for achieving successful immunization.</span></a><span style="font-size:8.5pt"></span></span></span></span></span></span><br> &nbsp; گلبول‌های قرمز, فاکتور Rh , پپتیدها, ایمونیزاسیون, خرگوش‌ها Red Blood Cells, Rh Factor, Peptides, Immunization, Rabbits 45 52 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-739-6&slc_lang=fa&sid=1 Fatemeh Yari فاطمه یاری f.yari@ibto.ir 9100319475328460027424 9100319475328460027424 Yes استاد مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون Fatemeh Gorzin فاطمه گرزین 9100319475328460027425 9100319475328460027425 No مرکز تحقیقات انتقال خون‌ ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون