fa تشخیص مولکولی حداقل بیماری باقیمانده در کودکان ایرانی مبتلا به لوسمی لنفوبلاستی حاد با ارزیابی ژن‌های بازآرایی شده زنجیره‌های سنگین و سبک کاپا ایمونوگلوبولین ايمونوهماتولوژي Imunohematology پژوهشي Research <p align="justify">  چکید ه </p><p align="justify"> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p align="justify"> <strong> بازآرایی قطعات ژنی مختلف متغیر( </strong><strong>V </strong><strong>)، تنوع( </strong><strong>D </strong><strong>)، اتصال( </strong><strong>J </strong><strong>) و ثابت( </strong><strong>C </strong><strong>) تنوع زیادی را در </strong><strong>IgH </strong><strong>و </strong><strong>Ig </strong><strong>k </strong><strong>ایجاد می‌کند و منجر به تشکیل توالی‌های اختصاصی می‌گردد که برای هر سلول یا کلون خاص است. در لوسمی‌های لنفوبلاستی نیز بازآرایی مشابه سلول‌های طبیعی در ژن‌های </strong><strong>IgH </strong><strong>و </strong><strong>Ig </strong><strong>k </strong><strong>ایجاد می‌گردد که می‌تواند به عنوان شاخص کلونالیتی و ارزیابی </strong><strong>MRD </strong><strong>مورد استفاده قرار گیرد. هدف از مطالعه حاضر بررسی الگوی بازآرایی ژن‌های </strong><strong>IgH </strong><strong>، </strong><strong>Ig </strong><strong>k </strong><strong>در </strong><strong>ALL </strong><strong>کودکان از نوع پیش‌سازهای </strong><strong>B </strong><strong>توسط </strong><strong>PCR </strong><strong>به منظور پی‌گیری </strong><strong>MRD </strong><strong>پس از شروع درمان می‌باشد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> در مطالعه آینده‌نگر حاضر 183 کودک با تشخیص اولیه لوسمی حاد قبل از شروع درمان بررسی شدند. پـس از ارزیابـی مـرفولـوژی(% 41: 2 </strong><strong>L </strong><strong>؛ % 44: 1 </strong><strong>L </strong><strong>) و ایمـونوفنوتیپ، تنها 140 بیمار با تشخیص </strong><strong>B-precursor ALL </strong><strong>برای مطالعه انتخاب شدند که 3/53% جمعیت را پسران و 7/46% را دختران(14/1: </strong><strong>M/F </strong><strong>) با میانگین سنی 6/63 ماه(حداقل: 6 ماه و حداکثر 156 ماه) ابتلا تشکیل می‌دادند. سلول‌های تک هسته‌ای که بلاست‌ها را نیز شامل می‌شد در زمان تشخیص، روز 14، روز 28(انتهای درمان القایی)، 45 روز تا 3 ماه، 3 تا 6 ماه و 6 تا 12 ماه پس از شروع درمان بیماران پس از ارزیابی مرفولوژی با گرادیان غلظتی جدا شدند. پس از استخراج </strong><strong>DNA </strong><strong>، آزمایش </strong><strong>PCR </strong><strong>به منظور تکثیر منطقه خیلی متغیر ژن </strong><strong>IgH </strong><strong>( </strong><strong>CDR-3 & 1 </strong><strong>) و </strong><strong>Ig </strong><strong>k </strong><strong>( </strong><strong>V </strong><strong>k </strong><strong>I-IV/ Kde </strong><strong>) با استفاده از آغازگرهای مشترک انجام شد. محصولات </strong><strong>PCR </strong><strong>پس از آنالیز هترودوپلکس و الکتروفورز بر روی ژل پلی‌آکریلامید و رنگ‌آمیزی نقره مورد بررسی قرار گرفته و پس از تعیین توالی جهت تایید با توالی‌های مشابه در بانک ژنی مقایسه شدند. آنالیز آماری با برنامه نرم‌افزاری 5/11 </strong><strong></strong><strong>SPSS </strong><strong>انجام شد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> 114 نفر(5/90%) از بیماران دارای بازآرایی کلونال در ژن </strong><strong>IgH </strong><strong>با استفاده از آغازگرهای مشترک نواحی </strong><strong>CDR-III </strong><strong>و </strong><strong>CDR-I </strong><strong>بودند(منوکلونال 8/57%، بای‌کلونال 9/34% و اولیگوکلونال 5/5%). الگوی کلونال </strong><strong>Ig </strong><strong>k </strong><strong>-Kde </strong><strong>در 59(67%) بیمار از موارد </strong><strong>BP-ALL </strong><strong>وجود داشت(10% بای‌کلونال). با توجه به ارزیابی مرفولوژی معمول حدود 92% از بیماران در فازهای ارزیابی شده در رمیسیون کامل بودند. </strong><strong>MRD </strong><strong>مثبت با استفاده از بازآرایی‌های ژنی از بیش از 90%، به 20% با درمان در فازهای مختلف تعریف شده کاهش پیدا کرد. از چهار بیماری که در زمان پیگیری عود کردند 3 نفر </strong><strong>MRD </strong><strong>مثبت بوده و به جز یک بیمار همگی در رمیسیون کامل بالینی بودند. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p align="justify"> <strong> الگوی بازآرایی ژنی و مثبت شدن </strong><strong>MRD </strong><strong>در فازهای پس از درمان قابل مقایسه با موارد گزارش شده قبلی یا بیشتر از آن است و این اختلاف به دلیل اختلاف در روش، </strong><strong>DNA </strong><strong>و شاخص‌های مورد ارزیابی است. با توجه به نتایج حاصل می‌‌توان از این شاخص‌ها در تشخیص کلونالیتی و ارزیابی </strong><strong>MRD </strong><strong>استفاده کرد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> کلمات کلیدی </i>: بازآرایی ژن‌ها، حداقل بیماری باقیمانده، لوسمی لنفوبلاستی حاد </strong></p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i> Background and Objectives </i></strong></p><p>  Diversity of IgH and <i>Ig</i> <i>κ </i>molecules is generated during B and T Lymphocyte differentiation through the rearrangement of variable, diversity, junction and constant gene segments. Additionally, random insertion and deletions of nucleotides between gene segments make unique sequences which are cell or clone specific. Similar IgH and Igκ genes rearranged in normal cells of lymphoid leukemia cases can be used as a marker of clonality and for evaluation of minimal residual disease (MRD). The purpose of this study is to evaluate the pattern of <i>IgH</i> chain and <i>Igκ</i> gene rearrangements using polymerase chain reaction (PCR) in B-precursor acute lymphoblastic leukemias (ALL) to follow the MRD at day 14, day 28 (end of remission induction), week 10 , 3-6 months and 6-12 months after the initiation of treatment. </p><p> <strong><i> Materials and Methods </i></strong></p><p>  In our prospective study bone marrow aspirates of 183 children at the mean age of 63.6 months with diagnosis of acute leukemia were collected at admission before any chemotherapy. After reviewing cytomorphology and immunophenotyping, only 140 cases with diagnosis of B-precursor ALLs were selected for study. Mononuclear cells including leukemic blasts were isolated by density gradient. After DNA extraction, IgH and Igκ ( Vκ I-IV / Kde) were amplified by consensus primers using PCR. PCR products were analyzed after heteroduplex analysis and polyacrylamide gel electrophoresis (silver stain). The DNA sequences were compared and aligned with the sequences homologous for IgH and IgK published by Gene Bank. The follow up specimens were collected at day 14, day 28 (end of remission induction), day 45-month 3 , and 3-6 months and 6-12 months after initiation of treatment. After routine cytomorphologic analysis, similar PCR was done on follow up extracted DNAs in parallel with diagnosis DNA. MRD was considered to be approved positive if bands similar to those at the time of diagnosis were present. Statistical analysis using SPSS software (version 11.5) was performed. </p><p> <strong><i> Results </i></strong></p><p>  90.5% of patients had clonal IgH gene rearrangements. Monoclonal, biclonal and oligoclonal patterns were observed in 57.8%, 34.9% and 5.5% of patients with IgH (CDR III) rearrangement, respectively. Clonal patterns of Igκ-Kde were detected in 59 (67% n: 88) of BP-ALLs. According to cytomorphology about 92% of patients were in complete remission. MRD positivity decreased from more than 90% to 20% using different gene rearrangements in defined time points. Four patients who relapsed during follow up were MRD positive using 1-3 rearrangements and all except one were in clinical remission. </p><p> <strong><i> Conclusions </i></strong></p><p>  Clonal rearrangement of IgH had a pattern similar to other populations. IgK was slightly more frequent than previously reported and the VKI (25%) was the most common type. These differences can be explained by different techniques, DNAs and clonality markers. According to the results, these clonal markers can be used in diagnosis and follow up of MRD. </p><p> <strong><i> Key words: </i></strong>Gene rearrangement, Minimal residual disease (MRD), Acute lymphoblastic leukemia<strong></strong> </p><p>  </p> بازآرایی ژن‌ها, حداقل بیماری باقیمانده, لوسمی لنفوبلاستی حاد 123 136 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-133&slc_lang=fa&sid=1 B. Poopak دکتر بهزاد پوپک bpoopak@yahoo.com 9100319475328460010675 9100319475328460010675 Yes A.A. Pourfathollah دکتر علی‌اکبر پورفتح‌اله 9100319475328460010676 9100319475328460010676 No H. Najmabadi دکتر حسین نجم‌آبادی 9100319475328460010677 9100319475328460010677 No S.H. Yahyavi دکتر سید حسین یحیوی 9100319475328460010678 9100319475328460010678 No Y. Mortazavi دکتر یوسف مرتضوی 9100319475328460010679 9100319475328460010679 No P. Vosough دکتر پروانه وثوق 9100319475328460010680 9100319475328460010680 No S. Ansari Damavandi دکتر شهلا انصاری دماوندی 9100319475328460010681 9100319475328460010681 No KH. Arjomandy rafsanjani دکتر خدیجه ارجمندی رفسنجانی 9100319475328460010682 9100319475328460010682 No MT. Arzanian دکتر محمد تقی ارزانیان 9100319475328460010683 9100319475328460010683 No M. Izadyar دکتر مینا ایزدیار 9100319475328460010684 9100319475328460010684 No S. Alavi دکتر ثمین علوی 9100319475328460010685 9100319475328460010685 No GR. Bahoosh دکتر غلامرضا باهوش 9100319475328460010686 9100319475328460010686 No E. Shahgholi دکتر الهام شاهقلی 9100319475328460010687 9100319475328460010687 No AA. Hamidieh دکتر امیرعلی حمیدیه 9100319475328460010688 9100319475328460010688 No M. Franoosh دکتر محمد فرانوش 9100319475328460010689 9100319475328460010689 No G. Khosravipoor دکتر گلاره خسروی‌پور 9100319475328460010690 9100319475328460010690 No F. Haghnejad فریبا حق‌نژاد دوشانلو 9100319475328460010691 9100319475328460010691 No A. Yousefian ابوالفضل یوسفیان 9100319475328460010692 9100319475328460010692 No