Journal of Iranian Blood Transfusion

fa مقایسه القای پاسخ ایمنی در سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی توسط گلبول‌های قرمز واجد آنتی‌ژن RhD و عصاره غشایی حاصل از آن سلول‌ها در محیط کشت سلولی Compairing the Immune Response Induced in Peripheral Blood Mononuclear Cells by RhD+ Red Blood Cells and their Membrane Extract in Culture Medium ايمونولوژي Imunology پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">سابقه و هدف  سیستم گروه خونی Rh یکی از مهم‌ترین و پیچیده‌ترین سیستم‌های آنتی‌ژنی پس از ABO است. تولید آنتی‌بادی‌های اختصاصی ضد RhD برای کاربردهای تشخیصی و درمانی اهمیت بالایی دارد. هدف از این مطالعه، ارزیابی پاسخ ایمنی ایجاد شده در سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی به وسیله گلبول‌های قرمز واجد آنتی‌ژن RhD و عصاره غشایی آن‌ها در محیط کشت سلولی بود.   مواد و روش‌ها در این مطالعه تجربی، سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی (PBMCs) از 2 کیسه خون کامل با گروه خونی O منفی به روش گرادیان چگالی و با استفاده از معرف فایکول جداسازی شدند. سپس به منظورحذف سلول‌های مهارکننده ایمنی، سوسپانسیون سلولی حاصله به مدت 40 دقیقه با لوسین متیل استر (5/2 میلی‌مولار) مواجه شده و پس از شستشو، در معرض گلبول‌های قرمز واجد آنتی‌ژن RhD و عصاره غشایی آن‌ها در محیط کشت قرار گرفته و توانایی آن‌ها در القای تولید آنتی‌بادی توتال و اختصاصی با استفاده از آزمون ELISA ارزیابی شد. با توجه به محدود بودن تعداد تکرارهای آزمایش، از روش ویلکاکسون به عنوان روش آماری غیر پارامتریک استفاده شد.  یافته‌ها پس از ایمن‌سازی سلول‌های PBMCs با گلبول قرمز +O و عصاره غشایی آن‌ها، میزان تولید آنتی‌بادی‌ با روش کمـی ELISA تعیین شد. میانگیـن غلظـت تـوتال آنتی‌بـادی در مواجهـه بـا عصـاره غشایـی 51/19 ± 159/3 نانوگرم در میلی‌لیتر (4 =n) و در مواجهه با گلبول قرمز کامل 38/9 ± 136/5 نانوگرم در میلی‌لیتر (2 =n) ارزیابی شد. هم‌چنین، غلظت آنتی‌بادی اختصاصی علیه RhD در حضور عصاره غشایی 10/58 ± 38/17 و در حضور گلبول قرمز کامل 2/95 ± 18/75 نانوگرم در میلی‌لیتر اندازه‌گیری شد. بر اساس داده‌ها، هر دو فرم آنتی‌ژن قادر به القای پاسخ ایمنی هستند. آزمون ویلکاکسون نشان داد که تفاوت بین دو گروه از آنتی‌ژن‌ها در هر دو نوع  ارزیابی آنتی‌بادی کل و آنتی‌بادی‌های اختصاصی RhD معنا‌دار نمی‌باشد.  نتیجه گیری             بر اساس یافته‌های مطالعه، به نظر می‌رسد که  آنتی‌ژن غشایی گلبول قرمز نسبت به سلول کامل  بهتر بتواند در القای پاسخ ایمنی علیه آنتی‌ژن RhD در محیط کشت مؤثر باشد، ولی تفاوت آماری این دو معنادار نبوده و بر این اساس، استفاده از عصاره غشایی گلبول قرمز و سلول کامل هر دو می‌توانند در تولید آنتی‌بادی‌های اختصاصی علیه آنتی‌ژن RhD در شرایط کشت سلولی مد نظر قرار گیرند.  </div> <div style="text-align: justify;">Background and Objectives The Rh blood group system is one of the most significant and complex antigenic systems of blood group. The production of specific antibodies against RhD is of great importance for diagnostic and therapeutic applications. This study aims to evaluate the immune response generated in peipheral blood mononuclear cells (PBMCs) by red blood cells containing the RhD antigen and their membrane extracts in a cell culture medium. Materials and Methods In this experimental study, PBMCs were isolated from two whole blood units with O- blood type using a density gradient method and Ficoll reagent. After a 40-minute exposure to L-leucine methyl ester (2.5 mM) and subsequent washing, the cells were exposed to red blood cells containing the RhD antigen or their membrane extract in a culture medium. Their ability to induce the production of specific antibodies was assessed using the ELISA method. Results Following immunization of PBMCs with O+ red blood cells or their membrane extract, antibody production was quantitatively assessed using ELISA method. The mean concentration of total antibodies was 159.3±51.19 ng/mL in response to membrane extract (n=4) and 136.5±38.9 ng/mL following stimulation with O+ RBC (n=2). In addition, the concentration of RhD-specific antibodies was measured as 38.17±10.58 ng/mL in response to membrane extract and 18.75±2.95 ng/mL in response to O+ RBC cells. The data indicate that both antigenic forms are capable of inducing an immune response.  Wilcoxon method showed that the differences between two groups of antigens in both evaluated total antibodies and RhD-specific antibodies were not significant. Conclusions  Based on the findings of this study, it seems that the membrane extract of RBC plays a more effective role in the immunogenicity against the RhD antigen in compare to O+ RBC cells but the difference were not significant. Based on the data, the use of both membrane extracts and the whole red blood cells could be helpful in the context of immunization strategies in culture conditions.  </div> محیط کشت, ایمنی‌زایی, پاسخ آنتی‌بادی, سلول‌های قرمز خون In vitro, Immunizaltion, Antibody Response, Red Blood Cells 297 304 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-739-5&slc_lang=fa&sid=1 Faeze Kheiri Ardahaei فائزه خیری اردهایی 9100319475328460027286 9100319475328460027286 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون Fatemeh Yari فاطمه یاری f.yari@tmi.ac.ir 9100319475328460027287 9100319475328460027287 Yes استاد مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون Behnaz Amo Hossein بهناز عموحسین 9100319475328460027288 9100319475328460027288 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون