fa پیوند زیر پوستی سلول‌های بنیادی مزانشیمی موشی کشت شده در آلژنیت و بررسی تمایز به غضروف آن‌ها سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p>  <strong><i>سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> سلول بنیادی مزانشیمی، کاندید مناسبی برای درمان انواع بیماری از جمله ترمیم ضایعات غضروف مفصلی محسوب می‌شود و تلاش‌های زیادی در جهت کاربردی کردن استفاده از این سلول‌ها، در حال انجام است. در همین راستا، در مطالعه حاضر سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان موش NMRI ، در داخل ژل آلژنیت کشت شد و با تضعیف سیستم ایمنی رت، در زیر پوست آن پیوند گردید تا پتانسیل تمایز به غضروف آن در محیط <i>in vivo </i>بررسی شود. </strong></p><p> <strong> </strong><strong><i>مواد و روش‌‌ها </i></strong></p><p> <strong> مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. در این مطالعه موش‌های </strong><strong>NMRI </strong><strong>با سن تقریبی 6-4 هفته کشته و سلول‌های مغز استخوان آن‌ها با تراکم 500 سلول در سانتی‌متر مربع در ظروف 6 خانه کشت شدند. با انجام دو پاساژ متوالی، جمعیت خالصی از سلول‌های فیبروبلاستی مزانشیمی ظاهر شد. دو میلیون سلول مزانشیمی پاساژ دو، در یک میلی‌لیتر محلول آلژنیت معلق شد و ژل حاوی سلول به کمک محلول کلرید کلسیم به حالت ژل در آمد و به صورت زیر پوستی به رت پیوند شد. برای اجتناب از رد پیوند، رت‌ها به طور روزانه داروی سایکلوسپورین دریافت کردند. 5 هفته پس از پیوند، ژل‌ها از محل پیوند خارج شد و از لحاظ تمایز به غضروف با روش‌های ایمونوسیتوشیمی(رنگ‌آمیزی تولوئیدن بلو)، </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>و میکروسکوپ الکترونی بررسی شدند. </strong><strong></strong></p><p> <strong><i> یافته‌‌‌ها </i></strong></p><p> <strong> پس از پنج هفته محل پیوند به آرامی باز شد. بر روی ژل‌های پیوند شده بافت همبند و چربی پر از عروق خونی تشکیل شده بود. رنگ‌آمیزی تولوئیدن بلو برش‌های تهیه شده از ژل‌های حاوی سلول نشان داد که سلول‌ها در درون ژل در داخل ساختارهای شبه لاکونا واقع شده‌اند و مورفولوژی بیضی شکل دارند. نتایج </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>نشان داد که، مارکرهای غضروفی از جمله </strong><strong>mRNA </strong><strong>کلاژن تیپ </strong><strong>II </strong><strong>(مارکر غضروف هیالین)، </strong><strong>X </strong><strong>(مارکر کندروسیت‌های هیپرتروفه در آغاز استخوان‌سازی) و اگریکان به میزان زیادی تولید شده است. بررسی برش‌های ظریف نشان داد که سلول‌ها دارای شبکه آندوپلاسمی خشن فراوان و متسع هستند و در خارج آن‌ها ماتریکس خارج سلولی رشته‌ای ترشح شده است. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p>  <strong>سلول‌های مزانشیمی کشت شده در داخل ژل آلژنیت، پس از پیوند زیرپوستی،‌ به سلول‌های غضروف هیالین، که در آن نشانه‌ای از آغاز فرآیند استخوان‌سازی وجود دارد، تمایز می‌یابند. </strong></p><p> <strong><i> کلمات </i></strong><strong><i>کلیدی: </i></strong><strong></strong><strong></strong><strong>سلول‌های بنیادی مزانشیمی، آلژنیت، پیوند </strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong></p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Mesenchymal stem cells are appropriate candidates to treat diseases including articular cartilage defects. There are plenty of researches being conducted to make the application of these cells possible. The purpose of this study was to cultivate murine mesenchymal stem cells (MSCs) in alginate gel and transplant them subcutaneously to immuno-suppressed rats to examine their chondrogenic potential <i>in vivo</i>.</p><p>  </p><p> <strong><i> Materials and Methods </i></strong></p><p> 4-6 week old NMRI mice were sacrificed and their bone marrow cells were cultivated in 6-cell plates at the density of 500 cell/cm². The pure fibroblastic cells appeared after two passages. 2×10⁶ fibroblastic cells were mixed with 1 ml of alginate solution and converted into gel by being exposed to calcium chloride solution. MSCs-embedded alginate gel were then transplanted subcutaneously to 6 rats that had received an immunosuppressive drug (cyclosporine) for transplant rejection to be avoided. 5 weeks after transplantation, the alginate gels were removed and evaluated by histochemistry, RT-PCR for certain cartilage markers, and transmission electron microscopy.</p><p> <strong><i> </i></strong></p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> 5 weeks after transplantation, the skin was incised and the alginate gel with its surrounding vascular connective tissue were removed. Tuloidine blue staining indicates that the cells within the gel assumed oval morphology and occupied lacuna-like cavities. RT-PCR analysis revealed that in these cells the mRNA of some cartilage markers such as collagen II (the marker of hyaline cartilage), collagen X (hypertrophied chondrocyte marker in osteogenesis), and aggreacan were largely produced. Ultra-thin sections analysis showed that the cells within the lacuna-like cavity of alginate gel contain a large amount of expanded rough endoplasmic reticulum and secret fibrillar extra cellular matrix. </p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> Transplanted murine MSCs cultivated in alginate gel can differentiate into hyaline cartilage with the sign of osteogenic initiation.</p><p> <strong> </strong></p><p> <strong><i> Key words: </i></strong>Mesenchymal stem cells, Alginate, Transplantation<strong><i /></strong></p><p>  </p> سلول‌های بنیادی مزانشیمی, آلژنیت, پیوند Mesenchymal stem cells, Alginate, Transplantation 105 114 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-131&slc_lang=fa&sid=1 M.R. Eslaminejad دکتر محمدرضا باغبان اسلامی‌نژاد bagesla@yahoo.com 9100319475328460010669 9100319475328460010669 Yes L. Taghiyar لیلا تقی‌یار 9100319475328460010670 9100319475328460010670 No S. Kiani سحر کیانی 9100319475328460010671 9100319475328460010671 No A. Piryaee عباس پیریایی 9100319475328460010672 9100319475328460010672 No