fa عوامل تأثیرگذار در ایمنی‌زایی علیه آنتی‌ژن گروه خونی Kell در محیط کشت ايمونوهماتولوژي Imunohematology پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-weight:bold"><span lang="FA" style="line-height:80%"><span style="font-family:Jadid"><span style="font-weight:normal">چکید</span></span></span><span lang="AR-SA" style="line-height:80%"><span style="font-family:Jadid"><span style="font-weight:normal">ه</span></span></span><span lang="FA" style="line-height:80%"><span style="font-family:Jadid"><span style="font-weight:normal"></span></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span lang="FA" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%"><span style="font-family:Titr">سابقه و هدف </span></span></span></i></b></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:">ایمنی‌زایی در آزمایشگاه، امکان‌پذیر می‌باشد. در این روش سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی، جداسازی شده و با فاکتورهای لازم جهت ایمنی‌زایی در محیط کشت مواجه می‌شوند. در این مطالعه، به دنبال شناخت فاکتورهای مختلف و عوامل دخیل در فرآیند ایمنی‌زایی لنفوسیت‌های </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">B</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> در آزمایشگاه به عنوان مرحله مقدماتی در ایجاد آنتی‌بادی بر علیه آنتی‌ژن گروه خونی </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> بودیم. </span></span></span></b></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span lang="FA" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%"><span style="font-family:Titr">مواد و روش‌ها</span></span></span></i></b></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:">در یک مطالعه تجربی، آنتی‌ژن </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> از کیسه‌های خون کامل </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell⁺</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> جداسازی و تخلیص شد. سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی از کیسه‌های خون کامل </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell^-</span></span></b><b></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:">با استفاده از روش گرادیان دانسیته، جداسازی شدند و پس از مواجهه با ال ـ لوسیل ال ـ لوسین متیل استر، با کلیه فاکتورهای لازم جهت ایمنی‌زایی در محیط کشت با غلظت مناسب از آنتی‌ژن، ادجوانت و سیتوکاین‌های اینترلوکین 4 و اینترفرون گاما مواجه گردیدند. پس از 11-7 روز، سوپ‌روبی سلول‌ها از نظر تولید آنتی‌بادی با روش حساس الایزا بررسی شدند. </span></span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"></span></span></b></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span lang="FA" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%"><span style="font-family:Titr">یافته‌ها</span></span></span></i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:">مطلوب‌ترین شرایط کشت به منظور ایجاد ایمنی‌زایی و تولید آنتی‌بادی اختصاصی </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Anti-Kell</span></span></b><b><span style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> ، مواجهه سلول‌های تک هسته‌ای با غلظت 25/0 میلی‌مولار </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">LLME</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> و به کارگیری 1000-500 نانوگرم در میلی‌لیتر آنتی‌ژن </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> به همراه 10 میکرولیتر </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">MLC (Mix lymphocyte culture)</span></span></b><b><span style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> است. میانگین جذب نوری در طول موج 450 نانومتر که بیانگر تولید آنتی‌بادی اختصاصی علیه آنتی‌ژن </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> می‌باشد، در این حالت 03/0 </span></span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%">&plusmn;</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> 052/2&nbsp; به ‌دست آمد.</span></span></span></b></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span lang="FA" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%"><span style="font-family:Titr">نتیجه گیری</span></span></span></i></b></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="text-justify:inter-ideograph"><span style="line-height:80%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:">بر اساس مطالعه انجام شده، انجام ایمنی‌زایی در محیط کشت علیه آنتی‌ژن </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Kell</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> امکان‌پذیر می‌باشد و می‌توان با به کارگیری عوامل مختلف، تحریک سلول‌های تولیدکننده </span></span></span></b><b><span dir="LTR" style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:80%">Anti-Kell</span></span></b><b><span lang="FA" style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:80%"><span 2="" lotus="" style="font-family:"> در محیط کشت را بهینه سازی کرد.</span></span></span></b></span></span></span></span></span></span><br> &nbsp;</div> <div dir="rtl" style="text-align: left;"><span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:12.0pt">Abstract</span></b><b><span style="font-size:12.0pt"></span></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Background and Objectives</i></b></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><i>in-vitro</i> immunization is one of the common methods of immunization as a preliminary step in the production of Monoclonal Antibodies. In this method, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) are isolated and incubated in culture medium with necessary factors for immunization. Antigen-specific B lymphocytes proliferate and differentiate into cells that secrete specific antibodies. In the current study, we aimed to identify various factors and contributing elements on B cell In-vitro immunization process for the generation of antibody against Kell blood group antigen.</span></span></span></span></span><br> <br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Materials and Methods</i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">In this experimental study, Kell antigen was </span>purified from Kell⁺ whole blood. Peripheral blood mononuclear cells were isolated using a density gradient approach from Kell^- whole blood bag. After exposure to L-Leucyl-L-leucine methyl ester (LLME), they were incubated with other required factors for immunization, including antigen (500-1000 ng/ml), adjuvant (5-20 <span style="font-family:Symbol">m</span>g/ml), and cytokines (9.5 pg/ml). After 7-11 days, cells supernatant was evaluated using a sensitive method, ELISA, for antibody production.</span></span></span></span></span><br> <br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Results</i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">It was observed that the most desirable culture condition for immunization and further production of specific anti-Kell antibody from mononuclear cells was 0.25 mM concentration of LLME employing 500-1000 ng of Kell antigens and 10 microliter MLC. In the mentioned condition, the optical density was read at 450 nm as 2.052 &plusmn; 0.03, which was the representative of production of specific anti-Kell antibody.</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i></i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i>Conclusions&nbsp; </i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:10pt"><span><span><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Based on the study, immunization in culture medium against Kell antigen can be done. By employing different factors, the production of anti-Kell producing cells in culture condition can be optimized.</span></span></span></span></span></div> <div dir="rtl" style="text-align: left;"><br> &nbsp;</div> کلمات کلیدی: ایمنی‌زایی, آنتی‌بادی, سیستم گروه خونی Kell Key words: Immunization, Antibody, Kell Blood-group System 108 121 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1495-1&slc_lang=fa&sid=1 F. Tobeyani فاطمه توبه یانی 9100319475328460023422 9100319475328460023422 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون S. Milani سعیده میلانی 9100319475328460023423 9100319475328460023423 No استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون F. Yari فاطمه یاری f.yari@ibto.ir 9100319475328460023424 9100319475328460023424 Yes استاد مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون