Journal of Iranian Blood Transfusion

fa راه‌اندازی روش Real-Time PCR جهت تعیین بار پرووایرال ویروس لنفوتروپیک T انسانی نوع I به روش سایبرگرین جهت نمونه‌های اهداکنندگان خون Design a Real Time PCR with SYBR Green for quantification of HTLV-1 proviral load for blood donors ويروس شناسي Virology پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">چکیده سابقه و هدف استان خراسان در ایران برای ویروسHTLV-1  اندمیک است. با توجه به ناکارآمد بودن آزمایش‌های سرولوژیکی در شناسایی ویروس‌ها در دوره کمون، تایید جواب‌های نامشخص وسترن بلات و خطر انتقال ویروس HTLV-1 از راه خون و فرآوردههای خونی، آزمایش Real – Time PCR به روش سایبرگرین راه‌اندازی شد. نمونههای مورد آزمایش، مربوط به اهداکنندگان خون آلوده به این ویروس در پایگاه انتقال خون استان خراسان رضوی در سال 1396 بودند. مواد و روش‌ها در یک مطالعه تجربی، با استفاده از روش کلونینگ و رسم منحنی استاندارد، آزمایش Real - Time PCR برای تعیین پرووایرال لود راه‌اندازی شد. ابتدا  DNAژنومی از سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی استخراج شد. سپس محصول  PCR ژن Tax ، در یک وکتور کلونینگ قرار داده شد و با رقت‌سازی، منحنی استاندارد رسم و آزمایش Real – Time PCR با روش سایبرگرین راه‌اندازی شد. یافته‌ها با استفاده از محصول PCR برای ژن  Tax، وکتور pTZ57/T و باکتریE.Coli  (سوش TG1) کلونینگ انجام شد. صحت کلونینگ با Colony PCR و تعیین سکانس تایید شد. محصول کلونینگ به عنوان استاندارد آزمایش Real –Time PCR  استفاده شد و با رقت‌سازی، منحنی استاندارد رسم شد. شیب خط منحنی استاندارد 3/3 slope= و 99/0 = 2R بوده که نشاندهنده خطی بودن و کارآیی واکنش آزمایش می‌باشد. نتیجه گیری روش Real –Time PCR  جهت تعیین پرووایرال لود ویروس HTLV-1 مناسب است.  </div> <div dir="rtl" style="text-align: left;">Abstract Background and Objectives In Iran, Khorasan province is an endemic area for HTLV-1 virus. Considering the inability of serological tests to determine HTLV-1 in window period, their failure to confirm the indetermination results of western blot, and given the probability for HTLV-1 transfusion transmission, a SYBR green-based Real Time PCR was set to measure the HTLV-1 proviral load.                                                                                                  Materials and Methods In this experimental study, using a cloning method and drawing a standard curve, the Real -Time PCR test was run to determine the HTLV-1 proviral load. At first, genomic DNA was extracted from peripheral blood mononuclear cells. Then, the PCR product of the Tax gene was placed in a cloning vector and recombinant plasmid was diluted by drawing a standard curve and a real-time PCR test was conducted using SYBR Green method.    Results Cloning was performed using PCR product for tax gene, pTZ57/T vector, and E. coli (TG1 strain). Cloning accuracy was confirmed with Colony PCR and sequencing and used as the Real-Time PCR test standard. The standard curve was drawn with serial dilutions of recombinant  plasmid  containing  Tax-1  gene.  The  slope of the standard curve was 3.3 and R2 = 0.99 which indicates the linearity and efficiency of the test reaction.   Conclusions  Real - Time PCR method is an appropriate method to measure HTLV-1 proviral load.     </div> ویروس HTLV-1 , پروویروس, Real Time PCR Key words: HTLV-1, Provirus, Real-Time PCR 194 200 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1301-1&slc_lang=fa&sid=1 H. Ghasemzadegan حمیده قاسم زادگان 9100319475328460023781 9100319475328460023781 No مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون M. Shahabi مجید شهابی Majshahabi@yahoo.com 9100319475328460023782 9100319475328460023782 No استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون N. Rezaei نگار رضایی n.rezaei81@yahoo.com 9100319475328460023783 9100319475328460023783 No استادیار مرکز تحقیقات بیماریهای غیر واگیر غدد و متابولیسم دانشگاه علوم پزشکی تهران Z. Sharifi زهره شریفی sharifiz@yahoo.com 9100319475328460023784 9100319475328460023784 Yes استاد مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پزوهشی طب انتقال خون