fa ارزیابی پیوند هم‌زمان سلول‌های بنیادی مزانشیمی انسانی و سلول‌های CD34+ خون بند ناف به موش Balb/c اشعه دیده با روش سنجش کلونی طحال CFU-S عمومى General پژوهشي Research <strong><p align="justify">  چکید ه </p><p align="justify"> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p align="justify"> <strong> خون بند ناف حاوی تعداد زیادی سلول‌های پیش‌ساز ابتدایی است که برای پیوند بالینی استفاده می‌شوند ولی درصد موفقیت پیوند این سلول‌های بنیادی پایین است. لذا در این مطالعه سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>هم‌زمان با سلول‌های بنیادی مزانشیمی </strong><strong>(MSC) </strong><strong>به موش‌های </strong><strong>Balb/c </strong><strong>اشعه دیده، پیوند زده شد و نتایج به صورت شمارش تعداد کلون در سطح طحال ارزیابی گردید. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. نمونه‌گیری به روش تصادفی انجام شد. سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>خون بند ناف انسانی از نمونه خون بند ناف به روش ایمونومگنتیک و </strong><strong>MSC </strong><strong>از مغز استخوان طبیعی انسان جدا شد. </strong><strong>MSC </strong><strong>از نظر مارکرهای سطحی </strong><strong>CD166 </strong><strong>و </strong><strong>CD105 </strong><strong>و درصد خلوص سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>با فلوسایتومتری ارزیابی شد. سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>با دوز 10⁶× 2/0 تا 1 به طور هم‌زمان با </strong><strong>MSC </strong><strong>با دوز 10⁶×25/0 تا 1 به موش 6 تا 8 هفته‌ای اشعه دیده( </strong><strong>Gy </strong><strong>7) پیوند شد. پس از گذشت 11 روز، تعداد کلون‌ها در سطح طحال شمارش و به روش هماتوکسیلین و ائوزین </strong><strong>(H&E) </strong><strong>رنگ‌آمیزی شد. جهت ارزیابی وجود سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>انسانی در کلون موجود در طحال، این سلول‌ها با ذرات آهن </strong><strong>(SPIO) </strong><strong>نشان‌دار شده و به موش اشعه دیده تزریق شدند. طحال این گروه به روش آبـی پروس رنگ‌آمیزی شد. در آنالیز آماری جهت بررسی تعداد کلون از آزمایش کروسکال ـ والیس با نرم‌افزار </strong><strong>SPSS </strong><strong>استفاده شد. </strong><strong></strong></p><p align="justify"> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> ارزیابی فلوسایتومتری، درصد سلول‌های تهیه شده از خون بند ناف و مغز استخوان را برای سلول‌های بنیادی </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>حدود 90% و </strong><strong>MSC </strong><strong>را بیش از 96% نشان داد و 100 درصد سلول‌ها زنده بودند. تعداد کلون‌های طحال در پیوند هم‌زمان دوزهای 10⁵×3 و 2 </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>و دوزهای 10⁶×1 و 5/0 </strong><strong>MSC </strong><strong>به طور معنی‌دار در مقایسه با سایر گروه‌ها افزایش یافت(01/0 </strong><strong>p< </strong><strong>). گرانول‌های آهن با رنگ‌آمیزی آبی پروس در کلون‌های طحال مشاهده شد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p align="justify"> <strong> سلول‌های بنیادی مزانشیمی باعث تسریع پیوند سلول‌های </strong><strong>CD34⁺ </strong><strong>می‌شود و استفاده از پیوند هم‌زمان سلول‌های بنیادی خون بند ناف به همراه سلول‌های بنیادی مزانشیمی می‌تواند موفقیت پیوند سلول‌های بنیادی را افزایش دهد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> کلمات کلیدی </i>: سلول‌های بنیادی، پیوند هم‌زمان، خون بند ناف، سلول‌های مزانشیمی </strong></p></strong> <p>  <strong></strong></p><p>  <strong>Abstract</strong> </p><p> <i><strong>Background and Objectives</strong></i></p><p>  Umbilical cord blood (UCB) contains a high number of primitive progenitor cells for transplantation. However, the rate of UCB CD34⁺ stem cell engraftment is low. In this study we examined the effect of human MSCs (mesenchymal stem cell) on engraftment of human UCB-derived CD34⁺ cells in irradiated Balb/c mice. </p><p>  </p><p> <i><strong>Materials and Methods</strong></i></p><p>  Human UCB CD34⁺ cells were obtained from full-term normal deliveries by immunomagnetic techniques and MSCs were isolated by a standard methodology from bone marrow aspirates. Isolated MSCs were evaluated for cell-surface antigens of CD166 and CD105 by flowcytometry. The absolute count of CD34⁺ UCB stem cells was also determined by flowcytometry. Irradiated (7 Gy) Balb/c mice were transplanted intravenously with 0.2 to 1.0 × 10⁶ human UCB CD34⁺ cells in the presence or absence of 0.25 to 1 × 10⁶ human bone marrow-derived MSCs. The mice in every group on day 11 after transplantation were killed and their spleen dissected. In every group, colony assay and H and E staining were performed. To make sure of the presence of human stem cells in spleen colonies, UCB CD34⁺ cells were labeled with super paramagnetic iron oxide (SPIO) before transplantation. The colonies in spleen then underwent Prussian blue staining. In the statistical analyis, Kruskal-Wallis test using SPSS software was employed to determine the number of colonies. </p><p>  </p><p> <i><strong>Results</strong></i></p><p>  Flowcytometry assay showed that after purification, 90% of the cells were CD34⁺ and 96% marker positive for MSCs. Viablity of cells was 100%<strong>.</strong> Cotransplantation of low doses of UCB CD34⁺ cells (0.2 and 0.3 × 10⁶) and MSC (0.5 and 1 × 10⁶) resulted in a significant increase of the number of colony forming units spleen, in comparison with the engraftment of UCB CD34⁺ stem cells without MSC after 11 days (p<0.01). Prussian blue staining showed the Fe⁺² granules in UCB stem cells. This indicated that cells in the colonies were engrafted UCB CD34⁺stem cells. </p><p>  </p><p> <i><strong>Conclusions</strong></i></p><p>  The results showed that cotransplantation of MSC with UCB CD34⁺cells promotes engraftment of UCB CD34⁺cells. </p><p> <i><strong>�</strong></i></p><p> <i><strong> Key words : </strong></i><strong></strong>Stem cell, Cotransplantation, Umbilical cord blood, Mesenchymal stem cell </p> سلول‌های بنیادی, پیوند هم‌زمان, خون بند ناف, سلول‌های مزانشیمی Stem cell, Cotransplantation, Umbilical cord blood, Mesenchymal stem cell 343 353 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-110&slc_lang=fa&sid=1 Bahman Delalat بهمن دلالت 9100319475328460010934 9100319475328460010934 No Ali AKbar Pourfathollah علی‌اکبر پورفتح‌اله pourfa@modares.ac.ir 9100319475328460010935 9100319475328460010935 Yes Ali Akbar Movassaghpour علی‌اکبر موثق‌پور 9100319475328460010936 9100319475328460010936 No Masoud Soleimani مسعود سلیمانی 9100319475328460010937 9100319475328460010937 No Hosein Mazdarani حسین مزدارانی 9100319475328460010938 9100319475328460010938 No Saeed Kaviani سعید کاویانی 9100319475328460010939 9100319475328460010939 No Soraya Rasi Ghaemi ثریا راثی قائمی 9100319475328460010940 9100319475328460010940 No