fa راه‌اندازی روش RT-Nested PCR به منظور تشخیص ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک عمومى General پژوهشي Research <p>  چکید ه </p><p> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p> <strong> ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک( </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>) عامل ایجاد کننده سندرم نقص ایمنی اکتسابی انسانی”ایدز” می‌باشد. انتقال بیماری از طریق انتقال خون در دوره پنجره، در مراکز انتقال خون یک معضل جهانی محسوب می‌شود. علاوه بر این، نیاز مبرمی برای تشخیص سریع، حساس و دقیق عفونت </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>قبل از ظهور آنتی‌بادی در بدن فرد آلوده در بیمارستان‌ها و مراکز بهداشتی احساس می‌شود. تشخیص ژنوم ویروس </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>در نمونه‌های مشکوک، باعث جلوگیری از گسترش بیماری در جامعه و شیوع روز افزون بیماری خواهد بود. با استفاده از این روش می‌توان عفونت را در مراحل ابتدایی و قبل از ظهور آنتی‌بادی‌های اختصاصی تشخیص داد. هدف از این پژوهش طراحی روش بسیار حساس و سریع </strong><strong>RT-Nested PCR </strong><strong>جهت تشخیص عفونت </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>بود. </strong></p><p> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p> <strong> پژوهش انجام گرفته از نوع بنیادی ـ کاربردی بود. روش </strong><strong>RT-Nested PCR </strong><strong>به منظور جداسازی سکانسی حفاظت شده از بخش ژن </strong><strong>gag </strong><strong>در ویروس </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>طراحی و به کار گرفته شد. ابتدا با کمک روش ترانس‌کریپتاز معکوس، از روی ژنوم </strong><strong>RNA </strong><strong>ویروس، </strong><strong>cDNA </strong><strong>ساخته و پس از آن با روش </strong><strong>Nested-PCR </strong><strong>با استفاده از دو جفت آغازگر اختصاصی و در دو مرحله، قطعه‌ای از ژن مورد نظر ویروس </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>تکثیر داده شد و با کمک الکتروفورز، محصولات </strong><strong>PCR </strong><strong>مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به دست آمده با کمک آزمون </strong><strong>ANOVA </strong><strong>و نرم ‌افزار آماری </strong><strong>SPSS </strong><strong>تجزیه و تحلیل گردید. </strong></p><p> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p> <strong> تعداد 25 نمونه سرمی از مراحل مختلف عفونت(شامل مراحل بدون علامت، علامت‌دار و ایدز) و هم‌چنین 15 نمونه پانل استاندارد و 20 نمونه سرمی منفی جمع‌آوری شد و با روش فوق مورد بررسی قرار گرفت. در تمام موارد مثبت، باند مورد نظر بر روی ژل آگارز مشاهده شد، ضمن این که در هیچ کدام از نمونه‌های منفی، باندی مشاهده نگردید. </strong></p><p> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p> <strong> بر اساس نتایج به دست آمده در این پژوهش، نشان داده شد که روش راه‌اندازی شده دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی جهت تشخیص عفونت ویروس </strong><strong>HIV-1 </strong><strong>می‌باشد. هم‌چنین با توجه به حساسیت روش، به نظر می‌رسد که ژنوم ویروسی را می‌توان قبل از تغییرات سرمی و ظهور آنتی‌بادی‌ها تشخیص داد و از این رو می‌توان دوره پنجره‌ تشخیص عفونت را کوتاه‌تر کرد. </strong></p><p> <strong><i> کلمات کلیدی </i></strong><strong>: </strong><strong></strong><strong>PCR </strong><strong>دوگانه، </strong><strong>RT-PCR </strong><strong>، ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی تیپ یک، ژن </strong><strong>gag </strong><strong></strong></p><p>  </p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) is the causative agent of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) in man and diagnosis of HIV-1 genome in suspicious specimens is of special importance. Viral transmission through blood and blood products during the window period is considered to be an important concern. In addition, the employment of rapid, sensitive and accurate techniques is highly necessary for diagnosis of HIV-1 prior to antibody production in infants born from infected mothers. In the present study, a sensitive and rapid RT-Nested PCR to detect viral genome has developed. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> In this study, a sensitive RT-Nested PCR technique for detection of a conserved HIV-1 "gag gene" sequence was developed. By using a specific primer pair, the fragment was amplified in two rounds of PCR. In order to confirm positive results, the developed technique was applied to standard Iranian panel as well as to positive specimens from different infection and disease categories in which reactivity was proven by confirmatory HIV-1 tests (ELISA and western blot).</p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> Thirty five sera from different stages of the disease as well as 15 standard Iranian panels and 20 negative control sera were collected and tested by the developed technique. In positive cases, a specific band was observed on agarose gel electrophoresis, while no band could be detected for negative control sera. </p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> In this study, it was demonstrated that the developed HIV-1 RT-Nested PCR has a high sensitivity and specificity for diagnosis of HIV-1 infection. It has the advantage of viral genome detection prior to seroconversion and can be easily applied to detect HIV-1 infection during the window period. <strong></strong></p><p> <strong>�</strong></p><p> <strong><i>Key words</i></strong><strong><i> : </i></strong>Nested PCR<strong> , </strong>RT-PCR, HIV-1, Gag gen<strong>�</strong></p><p>  </p> PCR دوگانه, RT-PCR , ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی تیپ یک, ژن gag Nested PCR , RT-PCR, HIV-1, Gag gen 309 315 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-106&slc_lang=fa&sid=1 Javad Douzandeh جواد دوزنده 9100319475328460010915 9100319475328460010915 No Mehrdad Ravanshad مهرداد روانشاد ravanshad@modares.ac.ir 9100319475328460010916 9100319475328460010916 Yes Saeed Amel Jamehdar سعید عامل جامه‌دار 9100319475328460010917 9100319475328460010917 No Farzaneh Sabahi فرزانه صباحی 9100319475328460010918 9100319475328460010918 No