fa شناسایی جهش‌های ژن فاکتور IX انعقادی در بیماران هموفیلی B استان اصفهان با استفاده از روش SSCP و تعیین توالی عمومى General پژوهشي Research <p style="DIRECTION: rtl" align="right">  چکید ه </p><p align="justify"> <strong><i> سابقه و هدف </i></strong></p><p align="justify"> <strong> هموفیلی </strong><strong>B </strong><strong>یک بیماری وابسته به جنس مغلوب است که در اثر کاهش مقدار و یا نقص عملکرد فاکتور </strong><strong>IX </strong><strong>انعقادی رخ می‌دهد. ژن فاکتور </strong><strong>IX </strong><strong>انعقادی به طول 34 کیلو باز، دارای 8 اگزون است. جهش در نواحی مختلف ژن فاکتور </strong><strong>IX </strong><strong>انعقادی سبب نقص در پروتئین </strong><strong>IX </strong><strong>انعقادی و بیماری هموفیلی </strong><strong>B </strong><strong>می‌گردد. </strong></p><p align="justify"> <strong> هدف از این مطالعه تعیین جهش در ژن فاکتور </strong><strong>IX </strong><strong>انعقادی بیماران مبتلا به هموفیلی </strong><strong>B </strong><strong>در استان اصفهان و یافتن ارتباط بین ژنوتیپ و فنوتیپ این بیماران بود. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> مواد وروش‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> مطالعه انجام شده از نوع توصیفی بود. نمونه‌ها به روش غیر تصادفی آسان انتخاب شدند. </strong><strong>DNA </strong><strong>ژنومیک 24 بیمار مبتلا به هموفیلی </strong><strong>B </strong><strong>مراجعه کننده به بیمارستان سیدالشهدا(امید) اصفهان، طبق روش استاندارد استخراج شد. </strong><strong>PCR </strong><strong>و </strong><strong>SSCP </strong><strong>بر روی ژل پلی ‌اکریل آمید در شرایط غیر تقلیب کننده برای کلیه اگزون‌ها و نواحی مهم ژن فاکتور </strong><strong>IX </strong><strong>بیماران انجام گرفت. نمونه‌هایی که در </strong><strong>SSCP </strong><strong>، حرکت آن روی ژل در مقایسه با کنترل نرمال متفاوت بود، انتخاب و به روش ختم زنجیره تعیین توالی شدند. توالی‌های به دست آمده با نرم‌افزارهای بایوادیت و کروماس تجزیه شدند. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> یافته‌ها </i></strong></p><p align="justify"> <strong> 8/70% جهش‌ها از نوع </strong><strong>missense </strong><strong>، 3/8% جهش‌ها از نوع </strong><strong>nonsense </strong><strong>، 7/16% جهش‌ها از نوع </strong><strong>deletion </strong><strong>و 2/4% جهش‌ها از نوع </strong><strong>insertion </strong><strong>بودند. پلی‌مرفیسم مالمو در یک بیمار مشاهده شد. جهش‌های به دست آمده ناهمگن بوده و حدود نیمی از آن‌ها در اگزون 8 رخ داده بود که با نتایج موجود در بانک اطلاعاتی بیماران هموفیلی </strong><strong>B </strong><strong>مطابقت داشت. </strong><strong><i /></strong><strong>در طی این تحقیق 4 جهش جدید( </strong><strong>C31088G </strong><strong>، </strong><strong>C30857G </strong><strong>،_�</strong><strong>A17690C </strong><strong>_،</strong><strong>C6460G </strong><strong>) به دست آمد که تاکنون گزارش نشده بود. </strong><strong><i /></strong></p><p align="justify"> <strong><i> نتیجه گیری </i></strong></p><p align="justify"> <strong> از این یافته‌ها می‌توان در تشکیل یک بانک اطلاعاتی کشوری و نیز مشاوره ژنتیک در خانواده‌های این بیماران استفاده کرد. </strong></p><p align="justify"> <strong><i> کلمات کلیدی </i>: هموفیلی SSCP, B ، جهش</strong></p> <p> <strong> Abstract </strong><strong></strong></p><p> <strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p> Hemophilia B is an inherited recessive X-linked bleeding disorder caused by deficiency or defect of procoagulant factor IX (FIX). The factor IX gene spans 35kb of DNA and comprises of 8 exons. Mutations in the factor IX gene may result in deficient or defective coagulation factor IX causing the bleeding tendency known as hemophilia B. The aim of this study was to identify the causative mutations and genotype-phenotype correlation for mutations in some known patients with hemophilia B in Isfahan province. </p><p>  </p><p> <strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p> After informed consent was obtained, genomic DNAs of 24 hemophilia B patients referred to Omid hospital were extracted according to standard protocols. PCR amplification and single strand conformation polymorphism (SSCP) on nondenaturing polyacrylamid gel were performed separately on each sample for eight exons and exon-intron boundaries and promoter. The results of SSCP were compared to normal control and sequencing was performed for those with different migration patterns. </p><p>  </p><p> <strong><i>Results</i></strong></p><p> The sequencing results showed 70.8% missense mutation, 16.7% deletion, 8.3% nonsense mutation, and 4.2% insertion. Many of the mutations had occurred in exon 8 it came out to be similar to haemophilia B mutation database. Malmo polymorphism (Ala 148 Thr) was found in one family. Four novel mutations not previously reported in the database were also found. </p><p>  </p><p> <strong><i>Conclusions</i></strong></p><p> This study confirms the marked heterogeneity of factor IX mutations in the population. The results could be used to develop a national database and offer genetic counselling to families. </p><p> <strong>�</strong></p><p> <strong><i>Key words</i></strong><strong><i> : </i></strong><strong></strong>Hemophilia B, SSCP, Mutation<strong>�</strong></p><p>  </p> هموفیلی SSCP, B , جهش Hemophilia B, SSCP, Mutation 299 308 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-105&slc_lang=fa&sid=1 Esmat Kamali Dolatabadi عصمت کمالی دولت‌آبادی 9100319475328460010908 9100319475328460010908 No Morteza Karimipoor مرتضی کریمی‌پور Mortezakarimi@pasteur.ac.ir 9100319475328460010909 9100319475328460010909 Yes Shahram Samiee شهرام سمیعی 9100319475328460010910 9100319475328460010910 No Leila Kokabee لیلا کوکبی 9100319475328460010911 9100319475328460010911 No Siroos Zinali سیروس زینلی 9100319475328460010912 9100319475328460010912 No Nafiseh Nafissi نفیسه نفیسی 9100319475328460010913 9100319475328460010913 No Hamid Reza Hoorfar حمیدرضا هورفر 9100319475328460010914 9100319475328460010914 No