fa تاثیر هارمالین بر بیان ژن Dnmt1 و هیپومتیلاسیون پروموتور ژن P15 در رده سلولی لوسمیک NB4 خون و انكولوژي Hematology and Oncology پژوهشي Research <p align="center" dir="RTL"></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:jadid;">چکید</span><span style="font-family:jadid;">ه</span><span style="font-family:jadid;"></span><br> <strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">سابقه و هدف </span></span></em></strong><br> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">متیلاسیون </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DNA</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> در ناحیه پروموتر ژن&rlm;های سرکوبگر تومور از جمله </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> ، به عنوان یکی از مهمترین مکانیسم&rlm;های ایجاد بدخیمی&rlm;های خونی مطرح است</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;"> .</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">هارمالین یکی از آلکالوئیدهای مشتق شده از گیاه اسپند است که دارای خاصیت آنتی&rlm;پرولیفراتیو بر روی رده</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">های سلولی لوسمیک می&rlm;باشد. در این مقاله تاثیر هارمالین بر کاهش بیان ژن</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Dnmt1</span></span></em></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;و هیپومتیلاسیون ناحیه پروموتر ژن </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> در رده سلولی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">NB4</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> مورد بررسی قرار گرفت.</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;"></span></span></strong><br> <strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">مواد و روش‌ها</span></span></em></strong><br> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">در این مطالعه تجربی با استفاده از روش</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;"> MTT </span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">، تاثیرات سیتوتوکسیک بر رده سلولی</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;"> NB4 </span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;تا 72</span></span></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">ساعت بررسی شد</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">.</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> جهت بررسی چرخه سلولی پس از تیمار با هارمالین، از روش فلوسیتومتری استفاده شد. وضعیت متیلاسیون پروموتور ژن </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> با استفاده از روش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Methylation specific PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> بررسی شد. با استفاده از روش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Real-time PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> ، میزان بیان ژن</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">های</span></span></strong> <strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Dnmt1</span></span></em></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">و</span></span></strong> <strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">بررسی گردید.</span></span></strong><br> <strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">یافته‌ها</span></span></em></strong><br> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج نشان داد که داروی هارمالین از غلظت </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">&micro;g/mL</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> 15 به بالا، پس از 48 ساعت به صورت وابسته به دوز و زمان دارای خاصیت آنتی</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">پرولیفراتیو بر روی رده سلولی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">NB4</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> می‌باشد. آنالیز چرخه‌ سلولی نشان‌دهنده ایست سلول‌ها</span></span></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">در فاز </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">G0G1</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> است. هارمالین در غلظت </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌ &micro;g/mL</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">15 موجب کاهش بیان ژن </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Dnmt1</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> ، هیپومتیلاسیون پروموتور ژن‌</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;و افزایش مجدد بیان ژن</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;در رده سلولی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">&nbsp;NB4</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">می</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">&lrm;</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">شود. </span></span></strong><br> <strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">نتیجه گیری</span></span></em></strong><br> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">با توجه به اثر بخشی داروی هارمالین بر کاهش بیان ژن </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Dnmt1</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> و هیپومتیلاسیون پروموتور و افزایش بیان ژن </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">P15</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> در این رده سلولی، می</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">توان چنین پیشنهاد کرد</span></span></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">که این دارو می</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">تواند به عنوان یک راه‌کار درمانی مناسب به صورت‌ منوتراپی و یا داروی مکمل همراه با دارو</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">های متداول لوسمی پرومیلوسیتیک حاد مورد استفاده قرار گیرد.</span></span></strong><br> <br> &nbsp;</p> <p dir="RTL"></p> <p dir="rtl" style="text-align: left;"><strong>Abstract</strong><br> <strong><em>Background and Objectives</em></strong><br> One of the most important mechanisms of hematologic malignancies is DNA methylation in the promoter region of tumor suppressor genes such as <em>P15</em>. Harmalin is one of the alkaloids derived from plants that show anti-proliferative activity on leukemic cell lines. The effect of harmalin on <em>Dnmt1</em> gene expression and hypomethylation of <em>P15</em> promoter in NB4 cell line was evaluated.<br> &nbsp;<br> <strong><em>Materials and Methods</em></strong><br> In this experimental study, cytotoxic effects of harmaline were investigated until 72 hours on the NB4 cell line using MTT. Flow cytometry was performed in order to evaluate the cell cycle of NB4 cell line after treatment with harmalin. Gene promoter methylation status of <em>P15</em> was evaluated by Methylation Specific PCR. <em>Dnmt1</em> and <em>P15</em> gene expression was analyzed by Real-time PCR technique.<br> &nbsp;<br> <strong><em>Results</em></strong><br> 15&mu;g/ml harmalin after 48 hours showed a dose and time-dependent anti-proliferative properties on NB4 cell line, cell cycle analysis would stop NB4 cells in G0G1 phase of the cell cycle. Real-time PCR results showed that 15&mu;g/ml harmalin reduced gene expression of <em>Dnmt1</em>, induced hypomethylation of <em>P15</em> gene promoter and increased <em>P15</em> gene expression in NB4 cell line.<br> &nbsp;<br> <strong><em>Conclusions&nbsp; </em></strong><br> According to our data, the effect of harmalin on reduction of <em>Dnmt1</em> expression, <em>P15</em> promoter hypomethylation and <em>P15</em> reactivation in this cell line showed that it could be suggested as a therapeutic strategy, suitable for monotherapy or supplement for medication which is commonly used for APL (Acute Promyeloid Leukemia).<br> &nbsp;<br> <br> &nbsp;</p> <p></p> کلمات کلیدی: متیلاسیون, ژن, لوسمی Key words: Methylation, Gene, Leukemia 314 324 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1154-1&slc_lang=fa&sid=1 P. Nikkhoo پریسا نیکخو 9100319475328460018691 9100319475328460018691 No دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات A. Oodi آرزو اودی a.oodi@ibto.ir 9100319475328460018692 9100319475328460018692 Yes استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون F. Sotoodehnejadnematalahi فتاح ستوده نژاد نعمت الهی Fattah212@gmail.com 9100319475328460018693 9100319475328460018693 No استادیار گروه ژنتیک سلولی و مولکولی ـ دانشکده علوم پایه دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات