Journal of Iranian Blood Transfusion

fa روش اصلاح شده PCR-RFLP برای تشخیص جهش JAK2 V617F در بیماران مبتلا به نئوپلاسم‌های میلوپرولیفراتیو Modified PCR-RFLP for detection of JAK2V617F mutation in patients with myeloproliferative neoplasm هماتولوژي Hematology پژوهشي Research چکیده سابقه و هدف نئوپلاسم‌های میلوپرولیفراتیو، از جمله بدخیمی‌های خونی هستند که علایم بالینی بسیار متغیری دارند. تقسیم‌بندی بیماران میلوپرولیفراتیو به دو گروه دارای کروموزوم فیلادلفیا(Ph+) و فاقد آن(Ph-) می‌باشد. در گروه Ph- ، بیماریهای پلی‌سایتمی‌ورا، ترومبوسایتمی اساسی، میلوفیبروز اولیه و دیگر بیماری‌های نادر قرار میگیرد. این گروه از بیماران دارای جهش JAK2 V617F میباشند که با درصدهای مختلف دیده میشود. هدف از این مطالعه، اجرای روش اصلاح شده PCR-RFLP برای تشخیص جهشJAK2 V617F در بیماران مبتلا به نئوپلاسم‌های میلوپرولیفراتیو بود. مواد و روش‌ها در این مطالعه مقطعی، 47 بیمار با درخواست آزمایش JAK2 V617F ، مورد بررسی قرار گرفتند. برای تمامی نمونهها آزمایش تشخیصی  JAK2 V617F با استفاده از روش استاندارد ARMS TaqMan Probe انجام شد. جهت تایید نهایی، برخی از نمونهها مورد توالی‌یابی ژنی قرار گرفتند. برای شناسایی ناحیه جهش با استفاده از روش PCR-RFLP ، آغازگرهای اختصاصی و آنزیم BsaXI استفاده شد. با توجه به این که در این مطالعه نمونههای منفی و مثبت به همراه یک روش استاندارد برای تعیین جهش وجود داشت، محاسبه حساسیت و ویژگی این روش 100% تعیین گردید. تحلیل نتایج توسط آزمون t انجام شد. یافته‌ها نتایج PCR-RFLP جهش JAK2 V617F برای تمامی نمونهها کاملاً مشابه و منطبق با نتایج روشهای استانداردARMS TaqMan Probe  و تعیین توالی بود. نتیجه گیری روش PCR-RFLP دارای حساسیت تشخیصی قابل مقایسهای با روشهای Real Time PCR و تعیین توالی بود. مزیت این روش اصلاح شده، توانایی آن در افتراق انواع هموزیگوت و هتروزیگوت بیماران، وجود کنترل داخلی برای عملکرد آنزیم و هم چنین سهولت و صرفه اقتصادی آن است.   Abstract Background and Objectives Chronic myeloproliferative neoplasms (MPNs) are clonal hematopoietic stem cell disorders. They are heterogeneous in symptoms and mainly consist of Philadelphia chromosome positive (Ph+) and negative (Ph-). The Ph- group includes polycythemia Vera (PV), essential thrombocythemia (ET), primary myelofibrosis (PMF) and other rare disorders. In the latter group, substitution of phenylalanine for valine at codon 617 (JAK2V617F), could be relevant to the disease. In this study we used modified PCR-RFLP to detect JAK2 V617 F mutation in chronic myeloproliferative neoplasms.   Materials and Methods In this cross sectional study, for detection of JAK2 V617 F mutation, 47 subjects were enrolled and peripheral blood samples were collected between 2015 and 2016. The samples were collected from the clinic center of Arak city and diagnosed to be JAK2 V617F positive by TaqMan probe and sequencing methods. All samples were investigated for the mutation by modified PCR-RFLP using specific primers and BsaXI restriction enzyme. The data were analyzed by t-test.   Results Our modified PCR-RFLP for detection of JAK2 V617F mutation showed the same results as TaqMan probe and sequencing standard methods. In this study we have positive and negative samples and a standard method whose sensitivity and specificity was calculated to be 100% .   Conclusions  Our modified PCR-RFLP is a comparable method with gold standard methods, TaqMan probe and sequencing, for detection of JAK2 V617F mutation. The advantages of this modified method include its ability to detect JAK2 V617F in homozygote and heterozygote conditions, and the presence of the internal digestion control.     کلمات کلیدی: اختلالات میلوپرولیفراتیو, PCR , نئوپلاسم, کروموزوم فیلادلفیا Key words: Myeloproliferative Disorders, PCR, Neoplasm, Philadelphia Chromosome 289 294 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1125-1&slc_lang=fa&sid=1 A.R. Moradabadi علیرضا مرادآبادی alirezamoradabadi@yahoo.com 9100319475328460018677 9100319475328460018677 No دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کمیته تحقیقات دانشجویی A.R. Farsinejad علیرضا فارسی نژاد 9100319475328460018678 9100319475328460018678 No استادیار دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمان A. Fatemi احمد فاطمی ahmad.fatemi2@gmail.com 9100319475328460018679 9100319475328460018679 Yes استادیار دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمان