The Scientific Journal of Iranian Blood Transfusion Organization
فصلنامه پژوهشی خون
Sci J Iran Blood Transfus Organ
Medical Sciences
http://bloodjournal.ir
91
journal91
1027-9520
1735-8248
fa
jalali
1396
9
1
gregorian
2017
12
1
14
4
online
1
fulltext
fa
روش اصلاح شده PCR-RFLP برای تشخیص جهش JAK2 V617F در بیماران مبتلا به نئوپلاسمهای میلوپرولیفراتیو
Modified PCR-RFLP for detection of JAK2V617F mutation in patients with myeloproliferative neoplasm
هماتولوژي
Hematology
پژوهشي
Research
<p dir="RTL" style="text-align: justify;"><span style="font-family:jadid;">چکید</span><span style="font-family:jadid;">ه</span><span style="font-family:jadid;"></span><br>
<strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">سابقه و هدف </span></span></em></strong><br>
<strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">نئوپلاسمهای میلوپرولیفراتیو، از جمله بدخیمیهای خونی هستند که علایم بالینی بسیار متغیری دارند. تقسیمبندی بیماران میلوپرولیفراتیو به دو گروه دارای کروموزوم فیلادلفیا(</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Ph<sup>+</sup></span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">) و فاقد آن(</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Ph<sup>-</sup></span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">) میباشد. در گروه </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Ph<sup>-</sup></span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> ، بیماری­های پلیسایتمیورا، ترومبوسایتمی اساسی، میلوفیبروز اولیه و دیگر بیماریهای نادر قرار می­گیرد. این گروه از بیماران دارای جهش </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">JAK2 V617F</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> می</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">­</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">باشند که با درصدهای مختلف دیده می</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">­</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">شود. هدف از این مطالعه، اجرای روش اصلاح شده </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR-RFLP</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> برای تشخیص جهش</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">JAK2 V617F</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> در بیماران مبتلا به نئوپلاسمهای میلوپرولیفراتیو بود.</span></span></strong><br>
<strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">مواد و روشها</span></span></em></strong><br>
<strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">در این مطالعه مقطعی، 47 بیمار با درخواست آزمایش </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">JAK2 V617F</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> ، مورد بررسی قرار گرفتند. برای تمامی نمونه­ها آزمایش</span></span></strong> <strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">تشخیصی </span></span></strong> <strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">JAK2 V617F</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> با استفاده از روش استاندارد </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">ARMS TaqMan Probe</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> انجام شد. جهت تایید نهایی، برخی از نمونه­ها مورد توالییابی ژنی قرار گرفتند. برای شناسایی ناحیه جهش با استفاده از روش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR-RFLP</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> ، آغازگر­های اختصاصی و آنزیم </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">BsaXI</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> استفاده شد. با توجه به این که در این مطالعه نمونه­های منفی و مثبت به همراه یک روش استاندارد برای تعیین جهش وجود داشت، محاسبه حساسیت و ویژگی این روش 100% تعیین گردید. تحلیل نتایج توسط آزمون </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">t</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> انجام شد. </span></span></strong><br>
<strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">یافتهها</span></span></em></strong><br>
<strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">نتایج </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR-RFLP</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> جهش </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">JAK2 V617F</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> برای تمامی نمونه­ها کاملاً مشابه و منطبق با نتایج روش­های استاندارد</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">ARMS TaqMan Probe </span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> و تعیین توالی بود.</span></span></strong><br>
<strong><em><span style="font-family:titr;"><span style="font-size:9.0pt;">نتیجه گیری</span></span></em></strong><br>
<strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">روش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR-RFLP</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> دارای حساسیت تشخیصی قابل مقایسه­ای با روش­های </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Real Time PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:2 lotus;"><span style="font-size:11.0pt;"> و تعیین توالی بود. مزیت این روش اصلاح شده، توانایی آن در افتراق انواع هموزیگوت و هتروزیگوت بیماران، وجود کنترل داخلی برای عملکرد آنزیم و هم چنین سهولت و صرفه اقتصادی آن است.</span></span></strong><br>
<br>
</p>
<p dir="rtl" style="text-align: left;"><strong>Abstract</strong><br>
<strong><em>Background and Objectives</em></strong><br>
Chronic myeloproliferative neoplasms (MPNs) are clonal hematopoietic stem cell disorders. They are heterogeneous in symptoms and mainly consist of Philadelphia chromosome positive (Ph+) and negative (Ph-). The Ph- group includes polycythemia Vera (PV), essential thrombocythemia (ET), primary myelofibrosis (PMF) and other rare disorders. In the latter group, substitution of phenylalanine for valine at codon 617 (JAK2V617F), could be relevant to the disease. In this study we used modified PCR-RFLP to detect JAK2 V617 F mutation in chronic myeloproliferative neoplasms.<br>
<br>
<strong><em>Materials and Methods</em></strong><br>
In this cross sectional study, for detection of JAK2 V617 F mutation, 47 subjects were enrolled and peripheral blood samples were collected between 2015 and 2016. The samples were collected from the clinic center of Arak city and diagnosed to be <em>JAK2 V617F</em> positive by TaqMan probe and sequencing methods. All samples were investigated for the mutation by modified PCR-RFLP using specific primers and BsaXI restriction enzyme. The data were analyzed by t-test.<br>
<br>
<strong><em>Results</em></strong><br>
Our modified PCR-RFLP for detection of <em>JAK2 V617F</em> mutation showed the same results as TaqMan probe and sequencing standard methods. In this study we have positive and negative samples and a standard method whose sensitivity and specificity was calculated to be 100% .<br>
<br>
<strong><em>Conclusions </em></strong><br>
Our modified PCR-RFLP is a comparable method with gold standard methods, TaqMan probe and sequencing, for detection of <em>JAK2 V617F</em> mutation. The advantages of this modified method include its ability to detect <em>JAK2 V617F</em> in homozygote and heterozygote conditions, and the presence of the internal digestion control.<br>
<br>
</p>
کلمات کلیدی: اختلالات میلوپرولیفراتیو, PCR , نئوپلاسم, کروموزوم فیلادلفیا
Key words: Myeloproliferative Disorders, PCR, Neoplasm, Philadelphia Chromosome
289
294
http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1125-1&slc_lang=fa&sid=1
A.R.
Moradabadi
علیرضا
مرادآبادی
alirezamoradabadi@yahoo.com
9100319475328460018677
9100319475328460018677
No
دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمان، کمیته تحقیقات دانشجویی
A.R.
Farsinejad
علیرضا
فارسی نژاد
9100319475328460018678
9100319475328460018678
No
استادیار دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمان
A.
Fatemi
احمد
فاطمی
ahmad.fatemi2@gmail.com
9100319475328460018679
9100319475328460018679
Yes
استادیار دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمان