The Scientific Journal of Iranian Blood Transfusion Organization
فصلنامه پژوهشی خون
Sci J Iran Blood Transfus Organ
Medical Sciences
http://bloodjournal.ir
91
journal91
1027-9520
1735-8248
fa
jalali
1385
7
1
gregorian
2006
10
1
3
3
online
1
fulltext
fa
تهیه مواد جایگزین سرم جنین گاو و بررسی اثر آنها بر رشد دودمانهای سلولی هیبریدومایی و میزان ترشح آنتیبادیهای منوکلونال
preparation of fetal calf serum alternatives and their effects on growth and secretion of hybridoma cell lines
عمومى
General
پژوهشي
Research
<p>چکید ه </p><p><strong><i>سابقه و هدف </i></strong></p><p><strong>دستیابی به منابع جایگزین سرم جنین گاو به عنوان ماده مغذی کشت سلول به علت کمبود این نوع سرم و نیازهای متفاوت سلولهای مختلف همواره مورد بررسی می باشد . </strong><strong>این مطالعه به تهیه مواد مغذی جانشین سرم جنین گاو و بررسی اثر آنها بر رشد سلولها و ترشح آنتیبادیهای منوکلونال توسط دودمانهای سلولی هیبریدومایی پرداختهاست. </strong></p><p><strong><i>مواد وروشها </i></strong></p><p><strong>مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پلاکتهای تاریخ گذشته با گروههای مختلف به منظور استخراج عوامل رشد موجود در آنها مورد استفاده قرار گرفتند. پلاسما با گروه </strong><strong>AB </strong><strong>نیز به سرم تبدیل شد و اثر آن با محیطهای حاوی سرم جنین گاو، هیپوگزانتین ـ تیمیدین </strong><strong>(HT) </strong><strong>و1640 </strong><strong>RPMI </strong><strong>مورد مقایسه قرار گرفت. شاخصهای رشد مورد ارزیابی شامل شمارش ابتدایی سلولها، </strong><strong>Confluency </strong><strong>(میزان پر شدن چاهک) روزانه و تیتراسیون آنتیبادیهای منوکلونال آنتی </strong><strong>A </strong><strong>و آنتی </strong><strong>B </strong><strong>گروههای خونی بودند. آنالیز آماری شامل آزمون </strong><strong>t </strong><strong>تک نمونهای، برازش منحنی رگرسیون چندگانه لگاریتمی و تحلیل عاملی منحنیهای رشد توسط نرمافزار 12 </strong><strong>SPSS </strong><strong>انجام شد. </strong></p><p><strong><i>یافتهها </i></strong></p><p><strong>چهار ماده مغـذی سـرم </strong><strong>AB </strong><strong>انسانـی </strong><strong>(AB) </strong><strong>، سرم جنین گاو </strong><strong>(FCS) </strong><strong>، عصاره پلاکتی انسان </strong><strong>(PLT) </strong><strong>و مخلوط </strong><strong>AB </strong><strong>و </strong><strong>PLT </strong><strong></strong><strong>(ABP) </strong><strong>جهت رشد سلولهای هیبریدومایی موشی تولیدکننده آنتیسرمهای گروههای خونی </strong><strong>A </strong><strong>و </strong><strong>B </strong><strong>مورد ارزیابی قرار گرفتند و با شاخصهای رشد در محیط پایه 1640 </strong><strong>RPMI </strong><strong>مقایسه شدند. بیشترین اثر مثبت بر رشد به ترتیب نزولی عبارت بود از: 1- 5% </strong><strong>ABP </strong><strong>، 2- 10% </strong><strong>FCS </strong><strong>، 3- 10% </strong><strong>ABP </strong><strong>، 4- 5% </strong><strong>AB </strong><strong>، 5- 10% </strong><strong>AB </strong><strong>، 6- 5% </strong><strong>PLT </strong><strong>، 7- 20% </strong><strong>ABP </strong><strong>، 8- 10% </strong><strong>PLT </strong><strong>، 9- 20% </strong><strong>PLT </strong><strong>، 10- هیپوگزانتین ـ تیمیدین و تنها 20% </strong><strong>AB </strong><strong>مانع رشد گردید. تیتر آنتی </strong><strong>A </strong><strong>و آنتی </strong><strong>B </strong><strong>ایجاد شده توسط هیبریدومها در مقادیر 5 و 10 درصد از </strong><strong>PLT </strong><strong>، </strong><strong>AB </strong><strong>و مخلوط این دو </strong><strong>(ABP) </strong><strong>نسبت به </strong><strong>FCS </strong><strong>5 تا 10 درصد به ترتیب نزولی به صورت زیر به دست آمد: 1- 5% </strong><strong>PLT </strong><strong>، 2- 10% </strong><strong>PLT </strong><strong>، 5% </strong><strong>ABP </strong><strong>،10% </strong><strong>ABP </strong><strong>، 10% </strong><strong>AB </strong><strong>، 3- 5% </strong><strong>AB </strong><strong></strong><strong>. </strong></p><p><strong><i>نتیجه گیری </i></strong></p><p><strong>به طور کلی </strong><strong>FCS </strong><strong>دارای بیشترین اثر در شیب تکثیر و مرگ و کمترین اثر در مرحله ثبات منحنی رشد سلولها میباشد لذا جهت تکثیر سلولها در شمارش پایین مناسب به نظر میرسد. سرم </strong><strong>AB </strong><strong>، عصاره پلاکتی و مخلوط این دو در مقادیر مناسب دارای شیب کمتر تکثیر نسبت به </strong><strong>FCS </strong><strong>بوده و باعث طولانی شدن مرحله ثبات و کاهش شیب مرگ میگردند (این مواد در غلظتهای بالا باعث مرگ سلولها میشوند). بنابراین ممکن است جهت کشت سلول در سیستمهای ممتد کشت مناسب باشند. </strong></p><p><strong><i>کلمات کلیدی: </i></strong><strong></strong><strong>سرم انسانی، کشت سلول، کینتیک رشد، گروههای خونی، تحلیل عاملی </strong><strong></strong></p>
<p><strong>Abstract </strong><strong></strong></p><p><strong><i>Background and Objectives</i></strong></p><p>Providing fetal calf serum (FCS) alternatives as cell culture supplements is an important field of research to compensate for the FCS supply shortage.This study focused on preparation of fetal calf serum alternatives and their effects on growth and secretion of hybridoma cell lines.<strong><i></i></strong></p><p></p><p><strong><i>Materials and Methods</i></strong></p><p>Outdated human platelet units undergo extraction for its growth factors to be obtained. Human AB blood group plasma was also converted to serum and its growth effect was compared to FCS, hypoxanthine-thymidine (HT) and RPMI1640 as cell culture media and supplement. Cell growth indices were preliminary counting of cells , confluency as surface area of plates filled with cells, and titration of monoclonal anti-A and anti-B blood group antibodies collected from cultured mouse hybridoma cells. Statistical analysis including one sample t-test, logarithmic multiple regression curve fit, and factor analysis was done by SPSS v12 software. </p><p></p><p><strong><i>Results</i></strong></p><p>The four nutritional supplements of (1) human serum AB (AB), (2) human platelet extract (PLT), (3) equal mixture of AB & PLT (ABP), and (4) fetal calf serum as cell culture were examined on mouse hybridoma anti-A and anti-B monoclonal antibody producer cell lines for cell growth indices and compared with the same indices on RPMI1640 media. The growth-stimulating effects in descending order of values were (1) ABP5% , (2) FCS10% , (3) ABP10% , (4) AB5% , (5) AB10% , (6) PLT5% , (7) ABP20% , (8) PLT10% , (9) PLT20%, and (10)HT but AB20% inhibited growth of mentioned hybridoma cell lines. The titer of anti-A and anti-B monoclonal antibodies produced by cultured hybridoma on 5 and 10 percent concentration of AB , PLT and ABP compared to FCS5-10% at descending order were (1) PLT5%, (2) PLT10% , ABP5% , ABP10% , AB10%, and (3) AB5%. </p><p></p><p><strong><i>Conclusions</i></strong></p><p>In general FCS had the following effects on curves of cell growth: (1) the highest increase on slope of multiplication (ascending) phase, (2) the highest increase on slope of death (descending) phase, and (3) the lowest duration of stationary phase. Then, FCS can be appropriate for growth of cells at initial low cell count. Human serum AB, human platelet extract, and equal mixture of both at optimum concentrations (these supplements at high concentrations killed cells) compared to FCS showed (1) decreased slope of multiplication phase, (2) decreased slope of death phase, and (3) increased duration of stationary phase. Thus, AB and PLT may be suitable for continuous cell culture systems in which cell survival during longer times is required. Factor analysis was introduced as a model to evaluate kinetics of cell growth at different supplements. </p><p><strong></strong></p><p><strong>Key words</strong><strong> : </strong>Human serum, Cell culture, Growth kinetic, Blood groups, Factor analysis </p>
Array,سرم انسانی,کشت سلول,کینتیک رشد,گروههای خونی,تحلیل عاملی
Array,Human serum,Cell culture,Growth kinetic,Blood groups,تFactor analysis
221
232
http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-95&slc_lang=fa&sid=1
Golestani R
دکتر رضا گلستانی
9100319475328460010853
9100319475328460010853
No
Moazzeni S. M
دکتر سید محمد مؤذنی
Moazzeni@dr.com
9100319475328460010854
9100319475328460010854
Yes
Puorfathollah A.A
دکتر علیاکبر پورفتحاله
9100319475328460010855
9100319475328460010855
No
Hamidpour L
لطیف حمیدپور
9100319475328460010856
9100319475328460010856
No
Sharafi M
دکتر مجتبی شرفی
9100319475328460010857
9100319475328460010857
No
Attarchi Z
دکتر زهره عطارچی
9100319475328460010858
9100319475328460010858
No
Hadji-Beygi B
دکتر بشیر حاجی بیگی
9100319475328460010859
9100319475328460010859
No
Tavasoli F
فرزانه توسلی
9100319475328460010860
9100319475328460010860
No
Esmaili J
جمشید اسماعیلی
9100319475328460010861
9100319475328460010861
No
Reyvandi S
سعید ریوندی
9100319475328460010862
9100319475328460010862
No