فصلنامه پژوهشی خون

  چکیده

  سابقه و هدف

  پلاسمای انسان ماده‌ای‌حیاتی و منحصر به فرد است که حاوی پروتئین‌های مهم نظیر آلبومین، ایمونوگلوبولین، فاکتورهای انعقادی و غیره می‌باشد و مصارف دارویی دارد. فرآیند تخلیص ایمونوگلوبولین از پلاسما به روش اصلی پالایش با اتانل کوهن انجام می‌شود و محصول پایه ، فرکشن II می‌باشد. جهت دستیابی به فرکشن II با شرایط مناسب برای استفاده به عنوان ماده اولیه در خالص‌سازی ایمونوگلوبولین تزریق وریدی، از روش تغییر یافته کوهن استفاده گردید. هدف از تهیه این ماده حد واسط، استفاده از آن برای مراحل بعدی تخلیص و ویروس‌زدایی جهت تولید ایمونوگلوبولین تزریق وریدی بوده ‌است.

  مواد و روش ها

  مطالعه انجام شده از نوع تجربی (experimental) بود. به منظور تولید خمیر فرکشن II ، پروتئین‌های مختلف پلاسما با استفاده از اتانل در غلظت‌های متفاوت و در شرایط کنترل شده همراه با تنظیم دما، pH و قدرت یونی رسوب داده شد. در طی مراحل مختلف ، فرآیند پالایش نمونه‌های تولید شده به منظور ارزیابی فرآیند تولید مورد آزمایش قرار گرفت و نتایج حاصل از هر مرحله تولید با یکدیگر و نیز با پلاسما به عنوان ماده اولیه مقایسه گردید.

  یافته ها

  نتایج به دست آمده حاکی از بازده بالا ( gr/kg plasma ۲/۵ ) و خلوص مناسب (بالای ۹۰ درصد) فرکشن II مطابق استاندارد فارماکوپه به دست آمده بود به نحوی که سایر پروتئین‌های ضروری پلاسما که می‌تواند برای تهیه دیگر فرآورده‌های پلاسمایی مـورد استفـاده قرار گیرند نیز در شرایط مطلوب حفظ شدند. فرکشن II به دست آمده از نظر مقدار فعال کننده پری‌کالیکرین مطابق استاندارد فارماکوپه بود. در طی چند سری کاری انجام شده ، ساختار پروتئین تکرار پذیری خوبی را نشان داد که با استانداردهای استفاده شده نیز مطابقت داشت.

  نتیجه گیری

  فرکشن II به دست آمده یک ماده حد واسط مناسب برای تولید ایمونوگلوبولین تزریق وریدی می باشد که مقدار تجمعات و همچنین میزان فعال کننده پری کالیکرین آن در حد ناچیز است. از آن‌جایی که ساختار محصول به دست آمده در حد مطلوب است می‌توان از این روش برای تهیه فرکشن II در مقیاس نیمه صنعتی و حتی صنعتی استفاده نمود.

چکید ه

سابقه و هدف

دست‌یابی به منابع جایگزین سرم جنین گاو به عنوان ماده مغذی کشت سلول به علت کمبود این نوع سرم و نیازهای متفاوت سلول‌های مختلف همواره مورد بررسی می باشد . این مطالعه به تهیه مواد مغذی جانشین سرم جنین گاو و بررسی اثر آن‌ها بر رشد سلول‌ها و ترشح آنتی‌بادی‌های منوکلونال توسط دودمان‌های سلولی هیبریدومایی پرداخته‌است.

مواد وروش‌ها

مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پلاکت‌های تاریخ گذشته با گروه‌های مختلف به منظور استخراج عوامل رشد موجود در آن‌ها مورد استفاده قرار گرفتند. پلاسما با گروه AB نیز به سرم تبدیل شد و اثر آن با محیط‌های حاوی سرم جنین گاو، هیپوگزانتین ـ تیمیدین (HT) و۱۶۴۰ RPMI مورد مقایسه قرار گرفت. شاخص‌های رشد مورد ارزیابی شامل شمارش ابتدایی سلول‌ها، Confluency (میزان پر شدن چاهک‌) روزانه و تیتراسیون آنتی‌بادی‌های منوکلونال آنتی A و آنتی B گروه‌های خونی بودند. آنالیز آماری شامل آزمون t تک نمونه‌ای، برازش منحنی رگرسیون چندگانه لگاریتمی و تحلیل عاملی منحنی‌های رشد توسط نرم‌افزار ۱۲ SPSS انجام شد.

یافته‌ها

چهار ماده مغـذی سـرم AB انسانـی (AB) ، سرم جنین گاو (FCS) ، عصاره پلاکتی انسان (PLT) و مخلوط AB و PLT (ABP) جهت رشد سلول‌های هیبریدومایی موشی تولیدکننده آنتی‌سرم‌های گروه‌های خونی A و B مورد ارزیابی قرار گرفتند و با شاخص‌های رشد در محیط پایه ۱۶۴۰ RPMI مقایسه شدند. بیشترین اثر مثبت بر رشد به ترتیب نزولی عبارت بود از: ۱- ۵% ABP ، ۲- ۱۰% FCS ، ۳- ۱۰% ABP ، ۴- ۵% AB ، ۵- ۱۰% AB ، ۶- ۵% PLT ، ۷- ۲۰% ABP ، ۸- ۱۰% PLT ، ۹- ۲۰% PLT ، ۱۰- هیپوگزانتین ـ تیمیدین و تنها ۲۰% AB مانع رشد گردید. تیتر آنتی A و آنتی B ایجاد شده توسط هیبریدوم‌ها در مقادیر ۵ و ۱۰ درصد از PLT ، AB و مخلوط این دو (ABP) نسبت به FCS ۵ تا ۱۰ درصد به ترتیب نزولی به صورت زیر به دست آمد: ۱- ۵% PLT ، ۲- ۱۰% PLT ، ۵% ABP ،۱۰% ABP ، ۱۰% AB ، ۳- ۵% AB .

نتیجه گیری

به طور کلی FCS دارای بیشترین اثر در شیب تکثیر و مرگ و کمترین اثر در مرحله ثبات منحنی رشد سلول‌ها می‌باشد لذا جهت تکثیر سلول‌ها در شمارش پایین مناسب به نظر می‌رسد. سرم AB ، عصاره پلاکتی و مخلوط این دو در مقادیر مناسب دارای شیب کمتر تکثیر نسبت به FCS بوده و باعث طولانی شدن مرحله ثبات و کاهش شیب مرگ می‌گردند (این مواد در غلظت‌های بالا باعث مرگ سلول‌ها می‌شوند). بنابراین ممکن است جهت کشت سلول در سیستم‌های ممتد کشت مناسب باشند.

کلمات کلیدی: سرم انسانی، کشت سلول، کینتیک رشد، گروه‌های خونی، تحلیل عاملی