چکیده
سابقه و هدف
استان خراسان در ایران برای ویروسHTLV-۱ اندمیک است. با توجه به ناکارآمد بودن آزمایش‌های سرولوژیکی در شناسایی ویروس‌ها در دوره کمون، تایید جواب‌های نامشخص وسترن بلات و خطر انتقال ویروس HTLV-۱ از راه خون و فرآوردههای خونی، آزمایش Real – Time PCR به روش سایبرگرین راه‌اندازی شد. نمونههای مورد آزمایش، مربوط به اهداکنندگان خون آلوده به این ویروس در پایگاه انتقال خون استان خراسان رضوی در سال ۱۳۹۶ بودند.
مواد و روش‌ها
در یک مطالعه تجربی، با استفاده از روش کلونینگ و رسم منحنی استاندارد، آزمایش Real - Time PCR برای تعیین پرووایرال لود راه‌اندازی شد. ابتدا DNAژنومی از سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی استخراج شد. سپس محصول PCR ژن Tax ، در یک وکتور کلونینگ قرار داده شد و با رقت‌سازی، منحنی استاندارد رسم و آزمایش Real – Time PCR با روش سایبرگرین راه‌اندازی شد.
یافته‌ها
با استفاده از محصول PCR برای ژن Tax، وکتور pTZ۵۷/T و باکتریE.Coli (سوش TG۱) کلونینگ انجام شد. صحت کلونینگ با Colony PCR و تعیین سکانس تایید شد. محصول کلونینگ به عنوان استاندارد آزمایش Real –Time PCR استفاده شد و با رقت‌سازی، منحنی استاندارد رسم شد. شیب خط منحنی استاندارد ۳/۳ slope= و ۹۹/۰ = ۲R بوده که نشاندهنده خطی بودن و کارآیی واکنش آزمایش می‌باشد.
نتیجه گیری
روش Real –Time PCR جهت تعیین پرووایرال لود ویروس HTLV-۱ مناسب است.
