|
جداسازی، همسانه‌سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی
|
مهسا نایب هاشمی   ، مهشید محمدی پور ، حسین فهیمی ، مهریار حبیبی رودکنار ، محمدعلی جلیلی |
| استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون |
|
|
چکیده: (4774 مشاهده) |
چکیده
سابقه و هدف
فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلولهای بنیادی خونساز(HSCs) بازی میکند. هدف این مطالعه جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta بود. Rosetta علاوه بر ویژگیهای میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می‌رفت با فراهم کردن کدونهای نادر پروتئینهای یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد.
مواد و روش‌ها
مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلولهای Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-32a در E.coli TOP 10 همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت شد. بیان SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد.
یافته‌ها
توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلولهای Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-32a همسانه‌سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد.
نتیجه‌گیری
در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئینهای یوکاریوتی با کدونهای نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می‌شود.
|
|
| واژه‌های کلیدی: کلمات کلیدی: گلیکوزیلاسیون، سلول بنیادی، PCR |
|
|
متن کامل [PDF 492 kb]
(2721 دریافت)
| | متن کامل (HTML) (4627 مشاهده)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
بيوتكنولوژي
انتشار: 1395/12/24
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
