fa ارزیابی میزان بقای سلول‌های بنیادی مزانشیمی پس از مجاورت با سکرتوم حاصل از سلول‌های بنیادی مزانشیمی دست‌ورزی شده با ژن‌های Nrf2 و HIF-1α سلولهاي بنيادي Stem cells پژوهشي Research <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt">چکیده</p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>سابقه و هدف </strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>سلول‌های بنیادی مزانشیمی، یک منبع سلولی ایده‌آل برای پیوند می‌‌باشند. اما استرس‌های مختلف در طول تکثیر آزمایشگاهی منجر به کاهش بقای سلولی آن‌ها پس از پیوند می‌شود. بنابراین به کارگیری راه‌کارهای عملی جهت افزایش میزان بقای آن‌ها در ریز محیط سرشار از استرس بسیار ضروری است. هدف این مطالعه، بررسی اثر سکرتوم ترشحی سلول‌های بنیادی مزانشیمی دست‌ورزی شده با دو ژن </strong><em><strong><span dir="ltr">Nrf2</span></strong><strong> و <span dir="ltr">HIF-1&alpha</span></strong></em><strong> بر بقای این سلول‌ها، تحت استرس‌های سلولی مختلف بود.&nbsp; </strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.85pt"><strong>مواد و روش‌ها</strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>در یک مطالعه تجربی، پلاسمیدهای نوترکیب </strong><strong><span dir="ltr">pcDNA3.1-HIF-1&alpha</span></strong><strong> و </strong><strong><span dir="ltr">pcDNA3.1-Nrf2</span></strong><strong> به طور جداگانه و هم‌ زمان به درون سلول‌های بنیادی مزانشیمی بند ناف ترانسفکت شدند. 72 ساعت بعد، بیان </strong><em><strong><span dir="ltr">HIF-1&alpha</span></strong><strong> و <span dir="ltr">Nrf2</span></strong><strong> در سلول‌های دست‌ورزی شده به روش </strong></em><strong><span dir="ltr">RT-PCR</span></strong><strong> بررسی شد. گروه‌های سلولی مختلف با استرس اکسیداتیو، فقر سرمی و کمبود اکسیژن مواجه شدند. سکرتوم سلول‌های ترانسفکت شده جمع‌آوری و تغلیظ شده و با سلول‌های بنیادی مزانشیمی بند ناف مجاور شد. بقای سلول‌ها پس از اعمال شرایط استرس مشابه با روش </strong><strong><span dir="ltr">WST-1 </span></strong><strong>&nbsp;بررسی شد. </strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>یافته‌ها</strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>سلول‌های هم‌ زمان ترانسفکت شده، ژن‌های </strong><em><strong><span dir="ltr">HIF-1&alpha</span></strong><strong> و <span dir="ltr">Nrf2</span></strong><strong> را بیان کردند. این سلول‌ها میزان بقای (5/5% </strong></em><strong><span dir="ltr">&plusmn;</span></strong><strong> 5/84%) بیشتری را در مقایسه با گروه کنترل(4% </strong><strong><span dir="ltr">&plusmn;</span></strong><strong> 3/55%) نشان دادند. هم چنین بقای سلول‌های کشت داده شده با سکرتوم پس از مواجهه با استرس&lrm;های مختلف، 6% </strong><strong><span dir="ltr">&plusmn;</span></strong><strong> 3/81% و بقای گروه کنترل 3/4% </strong><strong><span dir="ltr">&plusmn;</span></strong><strong> 9/57% بود. </strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>نتیجه گیری</strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.25pt"><strong>سکرتوم سلول‌های دست‌ورزی شده، سلول‌های بنیادی مزانشیمی را در برابر استرس اکسیداتیو، فقر سرمی و کمبود اکسیژن محافظت می‌کند. </strong></p> <p dir="rtl" style="margin-right: 36.85pt"></p> <p style="margin-left: 34.85pt"><strong>Abstract</strong></p> <p style="margin-left: 35.1pt"><strong><em>Background and Objectives</em></strong></p> <p style="margin-left: 34.85pt">Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are the ideal cell source for transplantation. But different stresses during MSCs <em>in vitro</em> expansion lead to decreased survival rate after transplantation. Therefore, applying practical strategies to enhance their viability in stressful microenvironment is quite necessary. This study aimed to survey effects of <em>HIF-1&alpha-Nrf2</em>-engineered-MSCs secretome on MSCs survival under different stress conditions.</p> <p style="margin-left: 34.85pt"></p> <p style="margin-left: 34.85pt"><strong><em>Materials and Methods</em></strong></p> <table border="0" cellpadding="0" style="width: 91.8%" width="91%"> <tbody> <tr> <td style="width: 99.28%"> <p style="margin-left: 34.85pt">Recombinant pcDNA3.1-<em>Nrf2</em> and pcDNA3.1-<em>HIF-1&alpha</em> were transfected and co-transfected into umbilical cord MSCs (UC-MSCs) using FUGENE HD transfection reagent. After 72 hrs, expression of <em>Nrf2</em> and <em>HIF-1&alpha</em> were verified by RT-PCR. Different cell groups were exposed to hypoxic, serum deprived and oxidative stress conditions. The <em>HIF-1&alpha-Nrf2</em>-engineered-MSCs secretome was harvested and concentrated. Then, UC-MSCs were cultured in presence of this secretome and their viability was assayed using trypan blue exclusion dye and WST-1&nbsp;&nbsp; flowing by induction of the same stress conditions.</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p style="margin-left: 34.85pt"><strong><em>Results</em></strong></p> <p style="margin-left: 34.85pt"><em>HIF-1&alpha-Nrf2</em>-engineered-MSCs expressed <em>Nrf2</em> and <em>HIF-1&alpha. HIF-1&alpha-Nrf2</em>-engineered-MSCs indicated a higher survival rate (84.5 &plusmn; 5.5%) compared with the control group (55.3 &plusmn; 4%). Moreover, the survival rate of UC-MSCs cultured with <em>HIF-1&alpha-Nrf2</em>-engineered-MSCs secretome was 81.6 &plusmn; 6% and it was 57.9 &plusmn; 4.3% for the control group under the same stress conditions.</p> <p style="margin-left: 34.85pt"></p> <p style="margin-left: 34.85pt"><strong><em>Conclusions</em></strong></p> <p style="margin-left: 34.85pt"><em>HIF-1&alpha-Nrf2</em>-engineered-MSCs secretome protects MSCs against oxidative, serum deprived and hypoxic stress conditions.</p> <p style="margin-left: 34.85pt"></p><p style="margin-left: 34.85pt"></p> کلمات کلیدی: محیط رویی, سلول‎های بنیادی مزانشیمی, بقای سلولی Key words: Conditioned Medium, Mesenchymal Stem Cells, Cell Survival 318 330 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-818-1&slc_lang=fa&sid=1 F. Soltani فاطمه سلطانی m.jalili@ibto.ir 9100319475328460020802 9100319475328460020802 No تهران ـ ایران F. Amiri فاطمه امیری 9100319475328460020803 9100319475328460020803 No تهران ـ ایران M. Mohammadipour مهشید محمدی‌پور 9100319475328460020804 9100319475328460020804 No تهران ـ ایران M. Jalili محسن جلیلی 9100319475328460020805 9100319475328460020805 No کرج ـ ایران M. Habibi Roudkenar مهریار حبیبی رودکنار 9100319475328460020806 9100319475328460020806 No تهران ـ ایران M.A. Jalili محمدعلی جلیلی 9100319475328460020807 9100319475328460020807 No تهران ـ ایران ـ صندوق پستی: 1157-14166