Journal of Iranian Blood Transfusion

fa اثرات مهار بیان ژن Msi2 بر الگوی بیانی مسیر Musashi2-Numb و ژن‌های درگیر در تکثیر و آپوپتوز سلول‌های لوکمی میلوئیدی مزمن The Effects of Msi2 Knock down on Expression Levels of Musashi2-Numb Pathway and Genes Involved in the Proliferation and Apoptosis of Chronic Myeloid Leukemia Cells خون و انكولوژي Hematology and Oncology پژوهشي Research چکیده سابقه و هدف بیان ژن Numb به عنوان ژن تعیینکننده سرنوشت سلول، سبب کاهش رشد سلول‌های لوکمیایی و سطوح بالای ژن Msi2 منجر به مهار بیان ژن Numb در سلولهای لوکمی میلوئیدی مزمن می‌گردد. <a>هدف</a><a href="#_msocom_1" id="_anchor_1" name="_msoanchor_1" uage="JavaScript">[a1]</a>  از مطالعه، مهار ژن Msi2 توسط استراتژی RNAi و اثرات مهار Msi2 بر بیان محور Musashi2-Numb و ژنهای درگیر در تکثیر و آپوپتوز سلول‌های لوکمیایی K562 بود. مواد و روش‌ها در این مطالعه تجربی، الیگونوکلئوتید siRNA سنتتیک که ژن Msi2 را هدف قرار می‌دهد، با استفاده از لیپوفکتامین به سلولهای K562 به صورت دو بار تکرار ترانسفکت شد. تغییر بیان ژنهای Msi2 ، Numb ، P21 و Bcl-2 ، ۲۴ و ۴۸ ساعت پس از ترانسفکشن، توسط Real-time PCR ارزیابی شد. از آزمون فلوسایتومتری Annexin V-PI جهت ارزیابی القای آپوپتوز استفاده شد. آنالیز آماری  با آزمون t-test انجام گرفت. یافته‌ها با مهار ژن Msi2 ، بیان ژن Numb در رده سلولی K562 پس از 48 ساعت به بیش از دو برابر افزایش و متعاقب با آن، بیان ژن P21 به عنوان تنظیم کننده کلیدی چرخه سلولی افزایش و بیان ژن Bcl-2 به عنوان ژن ضدآپوپتوز کاهش یافت(05/0 p<). <a>نتایج</a><a href="#_msocom_2" id="_anchor_2" name="_msoanchor_2" uage="JavaScript">[a2]</a>  آزمون فلوسایتومتری، حاکی از افزایش القای آپوپتوز در سلول‌های K562 ، به بیش از 52% و 60% به ترتیب ۲۴ و ۴۸ ساعت پس از ترانسفکشن بود. نتیجه گیری به نظر می‌رسد ژن Msi2 گزینهای اختصاصی برای هدفگیری سلول‌های لوکمیایی بوده و مهار آن از طریق استراتژی RNAi منجر به القای آپوپتوز در سلول‌های لوکمیایی می‌گردد؛ که ممکن است گامی موثر به سوی درمان نهایی لوکمی به شمار آید.   <div></div> Abstract Background and Objectives The expression of Numb as a cell-fate determinant gene leads to inhibition of leukemic cell growth. The high levels of Musashi2 (Msi2) results in down-regulation of Numb in chronic myeloid leukemia cells. In this study we knocked down Msi2 using RNA interference (RNAi) strategy and investigated the effects of this knock down on the expression of Musashi2-Numb axis and genes involved in proliferation and apoptosis.   Materials and Methods In this experimental study, synthetic double stranded siRNAs designed to target human Msi2 were transfected to K562 cells using Lipofectamine in duplicate. Changes in the expression levels of Msi-2, Numb, P21, and Bcl-2 genes 48h after transfection were evaluated by real-time PCR. Induction of apoptosis in transfected leukemic cells was determined using Annexin-PI staining and flowcytometry analysis. Data were analyzed by t-test.   Results We found that upon Msi2 suppression, the expression levels of the cell-fate determinant Numb showed two-fold increase in K562 cells (p < 0/05). Msi2 down-regulation and subsequent increase in Numb expression levels caused the elevated expression of p21, as a cell cycle regulator (p < 0/05). In addition, Msi2 down-regulation promoted cell apoptosis via the down-regulation of Bcl-2 expression (p < 0/05). We observed that the rates of apoptosis in leukemic increased to 52% and 60%, 24h and 48h after transfection.   Conclusions  It seems that Msi2 could be an option for targeting leukemic cells and its down-regulation through RNAi strategy may lead to induction of apoptosis in leukemic cells. This approach may open up new opportunities for leukemia therapy.     کلمات کلیدی: لوکمی میلوئیدی مزمن, تزاید سلولی, آپوپتوز Key words: Leukemia, Chronic Myeloid, Cell Proliferation, Apoptosis 217 226 http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1148-1&slc_lang=fa&sid=1 F. Moradi فروزان مرادی 9100319475328460020745 9100319475328460020745 No S. Babashah صادق باباشاه sadegh.babashah@gmail.com 9100319475328460020746 9100319475328460020746 Yes استادیار گروه ژنتیک مولکولی M. Sadeghizadeh مجید صادقی زاده 9100319475328460020747 9100319475328460020747 No