RT - Journal Article T1 - Isolation, cloning and expression of human stem cell factor using prokaryotic expression system  JF - Blood-Journal YR - 2017 JO - Blood-Journal VO - 14 IS - 1 UR - http://bloodjournal.ir/article-1-1060-fa.html SP - 53 EP - 64 K1 - Key words: Glycosylation K1 - Stem cell K1 - PCR AB - چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(HSCs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta بود. Rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می‌رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و روش‌ها مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلول‌های Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده­ SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-32a در E.coli TOP 10 همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید ‌شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت ‌شد. بیان SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد. یافته‌ها توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلول‌های Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-32a همسانه‌سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد. نتیجه‌گیری در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئین‌های یوکاریوتی با کدون‌های نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می‌شود. LA eng UL http://bloodjournal.ir/article-1-1060-fa.html M3 ER -